【系列三】IPHASE/汇智和源 体外药代动力学研究热点问题解答

2023-07-17

体外药代动力学研究

—热点问题—

Q；体外PPB实验的实验方法如何选择？

A：目前，常用于血浆蛋白结合率测定的方法主要包括平衡透析法（equilibrium dialysis, ED）、超滤法（ultrafiltration, UF）和超速离心法（ultracentrifugation, UC）。但是，具体选用哪种方法需综合化合物的物理性质、化学性质和个人经验等。一般来说，ED可用于亲水性药物和高PPB药物（85-100%）；UF可用于不稳定、高度亲水的药物，具有中等至低PPB（＜85%）；UC可用于疏水性化合物的PPB研究。

Q；体外PPB实验的缓冲液如何选择？

A：PPB实验中最常用的缓冲液是 pH为7.4的磷酸钠或磷酸钾缓冲液。对于某些化合物，由于不溶性盐的形式或与蛋白质上药物的结合位点之间的相互作用等原因，可能需要用到其他的缓冲液。

Q；使用平衡透析法进行血浆蛋白结合实验时，应该如何选择适宜孔径大小的透析膜？

A：血浆中与药物结合的蛋白主要有白蛋白（Albumin，65KDa）、脂蛋白（Lipoprotein，200~3400 KDa）、a1-酸性糖蛋白（Alpha acid glucoprotein，44KDa）。白蛋白是血浆中含量最高的蛋白，占血浆蛋白总量的60%，是主要的药物结合蛋白，华法林即是与白蛋白结合的典型代表。透析膜孔径选择的原则是截留分子MW的一半，需达到90%以上的截留，且是透过分子MW的两倍。

Q；平衡透析法中二氧化碳是必须的吗？

A：体内血液（或血浆）的生理pH值范围是7.2~7.6，血液一旦从动物体内取出，血液中的二氧化碳便会逸出，导致pH的升高，从而影响化合物血浆蛋白结合的性质和程度。为了避免pH的变化，建议在实验之前使用少量高浓度磷酸将血浆pH调整至7.4或在二氧化碳培养箱中进行孵育培养。

Q；在平衡透析法中，是否需要设置缓冲液组，考察药物是否在设定时间内达到平衡？

A：建议设置该对照组，一方面可以考察这个药物会不会在特定时间内达到平衡，另一方面也可以评估药物在缓冲液中是否稳定。

Q；PPB实验要做几个种属？

A：原则上除人外，至少还需要选取毒理研究的动物种属，如果药效和毒理的种属不同，也需要加上。

Q；PPB实验的浓度如何设计？

A：一般应包括正式PK实验中的代表性有效浓度，高浓度建议接近或超过PK最高剂量的Cmax，建议几个种属设置相同浓度，也可以依据种属PK差异设置不同浓度，一般至少10倍的测定范围。

Q；非特异性吸附高怎么办？

A：使用表面活性剂预清洗UF装置可以最大程度地减少滤膜引起的非特异性吸附（NSB）。碱性化合物可使用5%苯扎氯铵，中性和酸性化合物可使用0.5~5%吐温80。为了对药物与超滤装置之间的NSB进行校正，可以将已知量的药物溶于血浆水（超滤后的空白血浆）并进行超滤，非特异性吸附的校正因子，即超滤前初始血浆中的药物浓度与超滤后血浆水中的药物浓度之间的比率。