正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右,经有效动员后,骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中,使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血。重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是外周血动员最常用的动员剂,它可选择性的作用于粒系造血祖细胞,促进其增殖、分化,并可增加外周血中性粒细胞的数目和功能。动员外周血单个核细胞是采集经动员后的健康供者的外周血,采用密度梯度离心的方法提取其单个核细胞,其各亚型细胞的数量、细胞免疫表型、分泌细胞因子能力和增殖能力等可能会与未动员外周血有一定差异。
1 原理
单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同,在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。
2 方法
1) 取新鲜抗凝动员外周血,按照1:1比例加入1×稀释洗涤液,将血液进行稀释(以降低血液粘稠度),轻柔混匀,备用。
2) 向无菌离心管内加入适量的单个核细胞分离液,将稀释后的血样平铺到分离液液面上方(分离液:稀释动员外周血=1:2),保持两液面界面清晰。
3) 800g,室温,离心 20min-30min(注:设置较慢的加速度和减速度,如果有十档,设为第三档)。
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