IPHASE/汇智和源 PBMC在免疫治疗药物研发中的应用热点问题解答
2024-07-17
IPHASE/汇智和源 PBMC在免疫治疗药物研发中的应用热点问题解答
2024-07-17
—热点问题—
Q：你们的不同物种的PBMC分离试剂盒的得率是多少啊？1ml的外周血可以得到多少的PBMC？
A：人的话比较稳定，1-2million/mL之间，大小鼠，犬，猪，猴之类的，不同供体得率不是很稳定，平均大概是4-5million/mL。
Q：小鼠的PBMC，复苏之后如何培养？
A：我们测试过用1640+10% FBS进行培养，最多培养过2天，再长时间就没培养过了。PBMC是混合细胞，包括单核细胞和淋巴细胞，长时间培养，各类型细胞的占比会发生改变，所以不建议对PBMC进行长时间培养。
Q：CD4+T细胞加普通培养基可以培养几天？
A：经多次验证，分选后的CD细胞在普通培养基中仅能维持24~48小时，且随着时间的延长细胞活力和状态都在不断的下降。
Q：PBMC可以在体外扩增吗？
A：PBMC在没有相关细胞因子存在情况下不能扩增。由于PBMC是一群混合细胞，即使添加了细胞因子也只能是某些亚型细胞的扩增，最终导致PBMC细胞组成比例发生改变。
Q：分选后的细胞想要培养，应该选择什么培养基？普通1640是否可以？
A：不同亚型免疫细胞扩增需要在基础培养基中添加不同的细胞因子或细胞因子组合，基础培养基可选用1640培养基。为满足客户的不同需求，IPHASE正在陆续推出不同亚型细胞的扩增、分化培养基，敬请期待！
Q：冻存PBMC，复苏后细胞亚群比例会改变么？
A：冻存PBMC复苏后细胞亚群比例是否改变与冻存液的冻存效果有关。冻存效果好的冻存液细胞冻存复苏后活率高，则细胞亚群比例不会发生显著改变。IPHASE推出的PBMC冻存液细胞复苏后活率＞90%，完全满足后续实验要求。
Q：阳选，阴选，适配体分选如何选择？
A：若靶抗原与磁珠偶联抗体的持续结合不影响后续实验，比如分选细胞用于RNA或蛋白的提取，则可以考虑阳选试剂盒。反之，则需要选择阴选或IPHASE的适配体无痕分选试剂盒。IPHASE适配体无痕分选试剂盒分选后纯度＞95%，且细胞不带磁珠和与靶抗原结合的适配体分子，兼具有阳选试剂盒和阴选试剂盒的优点。
Q：冻存PBMC能用于细胞分选试验吗？
A：IPHASE推出的分选试剂盒均可用于冻存PBMC的细胞分选。
Q：我公司最近想开发PBMC质控品，想寻找一款冻存效果较好的冻存液，有推荐吗？
A：IPHASE无血清细胞冻存液适用于您的需求，细胞复苏存活率＞90%，得率＞85%，复苏后细胞亚群比例不发生改变。
Q：通过阳性分选试剂盒得到的细胞是否可通过流式细胞仪进行检测？
A：通过阳性分选的方法得到的细胞与磁珠连接，但所使用磁珠为纳米磁珠，理论上不影响流式细胞仪的检测。如有疑虑，可尝试使用培养外加反复吹吸的方式使得细胞和磁珠脱离后再进行流式检测。需注意的是，流式抗体选择请严格参照产品说明。
Q：IPHASE的人PBMC进行HLA分型鉴定吗？IPHASE的人PBMC供体库有多大？
A：IPHASE的人PBMC均进行了HLA分型鉴定。IPHASE的人PBMC供体库目前有近百个donor，库容量正在逐渐增加，客户可以从我们人PBMC供体库中选择适合自己实验的PBMC。
Q：冻存PBMC复苏操作上应注意哪些细节？
A：首先，需要37℃预热复苏培养基。其次，水浴解冻细胞时要注意管内细胞融化状态，当融化至少量冰晶时终止水浴。最后，离心力、离心时间需按随货说明书建议进行参数设置。
Q：IPHASE人CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒刺激细胞扩增最长时间是多少？
A：IPHASE人CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒刺激细胞扩增我们只验证到15天，此时细胞仍保持良好状态，完全可以进一步延长时间进行扩增培养。
Q：使用人CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒对CD4+T细胞进行扩增，最终可以扩增多少倍？
A：我们在进行试验时，在整个细胞扩增周期结束后，大概可以扩增500倍，但具体的扩增倍数和细胞状态及试验操作有关。
Q：IPHASE提供的冻存人PBMC细胞有哪些规格？
A：IPHASE可提供冻存、新鲜两种状态的细胞，且包含5million/支，10 million/支，50 million/支等多种规格。
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凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品：
非SCI论文及IF≤5分，500元礼品；
5分＜IF≤8分 800元；
8分＜IF≤10分 1000元；
IF≥10分 2000元；
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