细胞和细胞分选常见问题
2024-08-09
2024-08-09
Q：免疫磁性细胞分选技术分选细胞的原理？
A：免疫磁性细胞分选技术是基于免疫学中抗原抗体之间特异性结合的原理，以磁性微粒作为载体，对其进行抗体或亲和配体包被，形成免疫磁性复合微粒，当其与混合细胞孵育后，磁性微粒表面抗体会与细胞表面的抗原决定簇发生抗原抗体的特异性反应，使得细胞被磁性复合微粒标记。在外加磁场的作用下，抗体与磁珠相连的细胞会因磁珠的磁性而滞留在磁场中，而不表达此抗原的细胞因不能与磁珠表面的特异性抗体结合而没有磁性，不能够在磁场中滞留，从而使目的细胞与非目的细胞分开，得到较高纯度的目的细胞。
Q：阳性分选和阴性分选的联系和区别？
A：根据分选过程中所标记细胞类型的不同，可将免疫磁性细胞分选系统分为阳性分选和阴性分选。阳性分选是将目的细胞亚群直接从细胞悬液中分离出来，分选过程只需一种抗体（目的细胞对应抗体）参与，即可达到高纯度的分选，但因细胞与磁珠连接在一起，可能会对细胞造成刺激。阴性分选是从多细胞悬液中分离去除非目的细胞而得到目的细胞的一种方法，分选过程需要多种抗体（非目的细胞对应抗体）的参与，因目的细胞未与磁珠连接，对细胞无刺激，但可能会因为非目的细胞未被充分去除，造成分选效率和分选纯度低。
Q：阳性分选&阴性分选？如何选择合适的产品？
A：要选择合适的产品，需要综合试验目的和分选方式自身的特点。阳性分选试剂盒分选纯度高、特异性好，但细胞与磁珠连接；阴性分选试剂盒细胞不与磁珠连接，分选纯度可能较阳选稍低。若想通过磁珠分选去除某类细胞，推荐使用阳性分选试剂盒；若想得到目的细胞，用于后期培养，建议选择阴选试剂盒。
Q：一个10 test的分选试剂盒可以分选出多少细胞？
A：试剂盒中1 test可以处理1×107个PBMC，10 test总共可处理1×108个PBMC，试剂盒分选效率可达90%以上，但具体可以分选出多少细胞还需评估目的细胞在PBMC中的理论数量。
Q：要进行细胞分选如何选择PBMC？新鲜&冻存？
A：新鲜PBMC可保证较好的细胞状态和分选效果，建议使用新鲜PBMC进行亚型细胞的分选。若新鲜PBMC难以获得，也可选择冻存PBMC，但分选纯度和回收率很难保证。
Q：分选试剂盒可用于哪些组织和器官的分选？
A：分选试剂盒进行细胞分选的基础是单细胞悬液，理论上可用于从任何富含目的细胞的细胞悬液中进行细胞分选。目前仅对从PBMC、脾脏单个核细胞分选进行过验证，如需用于特殊组织的分选需自行进行条件摸索和验证。
Q：本公司分选试剂盒的使用是否可搭配其他厂家的磁力架使用？
A：因本公司分选试剂盒均使用纳米磁珠，对磁力架的磁场强度要求较高，建议使用本公司配套专用磁力架进行细胞分选。如需使用其他厂家的磁力架，需自行对分选条件进行摸索和验证。
Q：分选温度对分选效果有什么影响？
A：试剂盒推荐在4℃的条件下进行细胞分选。在4℃的条件下进行细胞分选可在短时间内保持细胞的原始状态，分选温度过高，如37℃，可能会激活细胞的某些代谢反应，导致分选到的细胞活力变差。建议严格按照试剂盒推荐的试验条件进行细胞分选。
Q：通过阳性分选试剂盒得到的细胞是否可通过流式细胞仪进行检测？
A：通过阳性分选的方法得到的细胞与磁珠连接，但所使用磁珠为纳米磁珠，理论上不影响流式细胞仪的检测。如有疑虑，可尝试使用培养外加反复吹吸的方式使得细胞和磁珠脱离后再进行流式检测。需注意的是，流式抗体选择请严格参照产品说明。
Q：各亚型免疫细胞是通过哪种分选方式获得？
A：本公司提供的多种亚型免疫细胞均是通过免疫磁性阴性分选的方法，从新鲜分离的单个核细胞中分选获得，所有细胞均经过了纯度、活率等多个指标的检测，虽不同亚型细胞的纯度、活率有一定差异，但均可达到90%以上。
Q：如何进行T淋巴细胞的培养？
A：T淋巴细胞属于原代细胞，在体外不可直接培养。若想在体外使其维持并增殖，需使用CD3、CD28抗体共同刺激细胞，并在IL-2细胞因子存在的条件下进行培养。
Q：使用人的CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒，扩增之后的细胞上的磁珠如何去除？
A: 随着细胞的增殖，在整个细胞扩增周期结束后，大部分的磁珠会脱落的，然后磁性分离去除磁珠。
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