细菌回复突变试验（Ames试验）菌株组合方案——《药物遗传毒性研究技术指导原则》
2021-10-15
细菌回复突变试验（Ames试验）菌株组合方案——《药物遗传毒性研究技术指导原则》
2021-10-15
（一）细菌回复突变试验（Bacterial reverse mutation test）
1.菌株
组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌和/或色氨酸营养缺陷型埃希氏大肠杆菌，至少应包含下述五种菌株组合（除特殊说明外，均为鼠伤寒沙门氏菌）：
（1）TA98；（2）TA100；（3）TA1535；（4）TA1537或TA97或TA97a；（5）TA102或大肠埃希杆菌WP2 uvrA或大肠埃希杆菌WP2 uvrA（pKM101）。
菌株特性鉴定需符合要求，－80℃或液氮冻存备用。
2.浓度
至少应包含5个可用于结果分析的浓度。
最高浓度主要取决于受试物对细菌的毒性和/或溶解度：
（1）对于可溶性的无细菌毒性的受试物，推荐的最高浓度一般为5mg/皿（液体受试物为5µl/皿）。
（2）对于可溶性的有细菌毒性的受试物，应根据细菌毒性情况确定最高浓度（详见正文1.2.2）。
（3）对于难溶性的受试物，若未观察到细菌毒性，一般以最小沉淀浓度为评价的最高浓度；若观察到浓度相关性的细菌毒性或诱变性，则要求检测多个产生沉淀的浓度（详见正文1.2.3）。
3.代谢活化
一般采用诱导剂，如Aroclor 1254或苯巴比妥和β-萘黄酮联合诱导处理后的哺乳动物肝脏微粒体酶（S9）进行体外代谢活化试验，即在加S9和不加S9平行条件下测试。S9在S9混合液中的浓度一般为5%～30%（v/v）。
4.对照
代谢活化或非代谢活化条件下，均应设立平行阴性（空白对照和/或溶剂对照）和阳性对照组。阳性对照物应为已知的菌株特异性的阳性致突变剂。
5.方法
可采用标准平板掺入法或预培养法，受试物处理后48～72小时观察结果。每一浓度至少平行三皿。
6.结果判定
结果中应描述各浓度组细菌毒性大小和沉淀情况；结果表示为每皿的回复突变菌落数，并计算各组的均值和标准差。
至少在一个菌株上，在有或无代谢活化条件下，受试物所诱发的回复突变菌落数出现浓度依赖性的增加和/或在一个或多个浓度组上出现可重复性的增加，可判定为阳性结果。结果判定时应首先考虑试验结果的生物学意义，统计学分析有助于结果的评价。
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