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小核酸/ADC药研发好帮手：IPHASE多种属酸化肝组织匀浆

2023-11-09

2023-11-09

随着分子生物学的发展，涉及溶酶体相关的靶向药物逐渐成为疾病治疗的研究热点，越来越多的靶向药物进入临床。溶酶体是由单层膜包被的囊状结构，内含多种水解酶，可分解各种外源和内源的大分子物质，溶酶体功能缺陷可引起目动脉粥样硬化、神经退行性疾病、胰腺炎、自身免疫性疾病、溶酶体贮积症和癌症等疾病。然而，目前只有少数技术可以从细胞内提取溶酶体，而且提取出的溶酶中极易含有杂质。

一、酸化的肝组织匀浆液

肝脏作为药物代谢的重要器官，富含参与药物代谢所需的酶，是机体进行生物转化的主要场所，阐明药物在肝脏中代谢的关键酶及其代谢途径，对于临床用药的合理及安全性具有重大价值。研究发现，肝组织匀浆液经酸化处理后（PH:6.0），使其维持在一个较低的pH环境下，此时的环境与溶酶体内环境相似，极好地解决了溶酶体提取困难的问题，也方便了在体外研究溶酶体功能缺陷性疾病药物。

肝组织匀浆是指肝组织破碎后所获得的胶状混合物，其内含有大细胞片段的肝间质，主要由手工匀浆、机器匀浆和超声粉碎三种获得方式。肝组织匀浆的操作过程极为简便，可将药物直接加入到肝匀浆液中，考察其在肝匀浆液中的代谢情况，以此说明药物的代谢情况。由于其操作简单，在肝脏疾病的发生机制、药物代谢和毒性等生物医学研究中具有重要的应用价值。

二、酸化肝组织匀浆液应用

目前，靶向药物逐渐成为疾病治疗的研究热点，越来越多的靶向药物进入临床，如ADC药物和小核酸药物。在已上市的ADC药物中，释放有效载荷（paylaod）可通过含可切割连接子（cleavable linker）和不含可切割连接子（non-cleavable linker）两种方式，后者需要利用溶酶体内的蛋白酶来分解代谢payload。因此，开发ADC药物的前提是确定其释放payload的具体形式，通常体外payload释放实验则是在肝S9组分、溶酶体环境（酸化的肝匀浆液）或者靶细胞的孵育体系中完成。

同时，小核酸药物也是靶向治疗肿瘤的热点，而负责功效依赖的siRNA降解的化学或生化实体可能存在于肝间质中，所以用肝匀浆液在体外验证小核酸药物也逐渐成为研究热点。已有证据表明肝匀浆液已被用于表征N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）偶联的寡核苷酸的代谢，且肝匀浆液稳定性在体内代谢及体内基因敲低活性结果相关性好，不同种属间的肝匀浆液相关性也较好，所以可以采用肝匀浆液进行小核酸药物研究。