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生物实验室的蛋白定量“金标准”：BCA试剂盒完全解析

2025-12-23

Keywords：BCA蛋白浓度测定试剂盒；BCA；蛋白定量；标准曲线；BCA Protein Concentration Assay Kit；Bicinchoninic Acid；Protein Assay；Standard Curve;

在蛋白质功能研究的众多方法中，BCA法以其高灵敏度、对去垢剂出色的耐受性及操作简便等特点，成为实验室广泛采用的经典选择，尤其适用于成分复杂的细胞或组织裂解液。鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，开发、生产了BCA蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Concentration Assay Kit），为客户的生物试剂蛋白定量提供“一站式”服务。下文将带您快速掌握BCA法的核心原理与IPHASE BCA蛋白浓度测定试剂盒标准化操作。

01 BCA 蛋白浓度测定原理

BCA 法是对经典 Lowry 法的改进，克服了后者步骤繁琐、对干扰物敏感等局限性，具有操作简便快捷、灵敏度高、线性范围宽、抗干扰性能优良、兼容性能好及经济实用等多种优势。

BCA（Bicinchoninic Acid，2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠）蛋白质定量法是一种广泛应用的蛋白质检测方法，其原理基于蛋白质的还原。蛋白质在碱性条件下可将二价铜离子（Cu²⁺）还原为一价铜离子（Cu⁺），随后一价铜离子进一步与BCA试剂形成稳定的紫色络合物，且该络合物在562 nm波长处具有最大吸光度，通过测量吸光度即可定量蛋白质浓度。具体而言，反应分为两步：第一步，在碱性条件下，蛋白质中的肽键、酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸残基能够还原Cu²⁺为Cu⁺。第二步，生成的Cu⁺与两个BCA分子螯合，形成紫色的Cu⁺-BCA络合物。该方法灵敏度高、操作简便，且对某些去污剂具有较好的耐受性。

（图片来源于网络）

02 IPHASE BCA蛋白浓度测定试剂盒操作步骤

根据以上原理，IPHASE BCA蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Concentration Assay Kit）采用改良型 BCA 法配方，并根据仪器不同，分别提供按照“酶标仪”及“分光光度计”的操作流程，客户可根据现有仪器按需购买、操作。具体操作步骤及数据分析如下：

（1）稀释标准品

使用PBS稀释液将2 mg/mL BSA标准品依次稀释即得到如下浓度系列的标准曲线样品：

管号	稀释液体积	BSA体积及来源	BSA终浓度（mg/mL）
A	0μL	200μL 原液	2.000
B	100μL	300μL 原液	1.500
C	200μL	200μL 原液	1.000
D	200μL	200μL B管稀释液	0.750
E	200μL	200μL C管稀释液	0.500
F	200μL	200μL E管稀释液	0.250
G	200μL	200μL F管稀释液	0.125
H	100μL	150μL G管稀释液	0.050
I	100μL	150μL H管稀释液	0.020
J	200μL	0	0（空白孔）