ADME—代谢酶/代谢反应表型研究（Reaction Phenotyping）
2024-07-17
2024-07-17
Q：为什么要进行代谢酶/代谢反应表型研究？
A：代谢酶/代谢反应表型研究，又称代谢酶谱/代谢反应谱研究，是新药研发过程中不可或缺的一部分。通过酶表型的研究，不但可识别（Identification）参与某药物生物转化的代谢酶/代谢反应以及各代谢酶/代谢反应贡献程度，而且在评估药物相互作用的可能性和程度，基因多态性酶的参与程度方面具有重要意义。
Q：代谢酶表型试验中，药物浓度该如何选择？人肝微粒体/重组酶浓度该如何选择？ 孵育时间如何设定？
A：在代谢酶表型试验中，仅需要设置一个药物浓度，通常与代谢稳定性试验的药物浓度一致；人肝微粒体蛋白浓度控制在1mg以内，即≤1mg/mL；重组酶浓度一般为10~30pmol/mL；孵育时间一般选择1~2个，可依据代谢稳定性试验的结构进行设定。
Q：在酶表型研究中，主要关注哪些酶？
A：在酶表型研究中，主要关注的CYP酶亚型有CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5共7种，通常情况下均需进行研究；主要关注的UGT酶亚型有UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B6和UGT2B15，有证据表明UGT酶为主要代谢途径时需研究。
Q：CYP450酶表型研究中，是否一定需要采用化学抑制法和重组酶法两种方法进行试验？
A：代谢酶表型研究是定性研究，目前的法规和行业观点都认为单一方法无法得出足够可靠的结论，需化学抑制法和重组酶法两种方法结合起来做结论。但一般也认为，结论中以化学抑制法的结果为主，重组酶法的结果为辅。
Q：CYP450酶表型研究中，化学抑制法和重组酶法结果不一致时该如何解释？
A：首先，这种情况不应该叫不一致，因为这是两个不同的系统代谢后的结果，这两种代谢系统出现的任何差异都不应该叫不一致，而是代谢系统自身的差异导致的正常现象；其次，肝微粒体是直接提取的肝脏的组分，是一种同源的代谢系统，而重组酶是通过蛋白表达系统表达出来的，是一种非同源的测试系统，所以结论中以化学抑制法的结果为主，重组酶法的结果为辅。
Q：如果代谢稳定性结果表明原形药的剩余量接近100%，还需要进行CYP酶的代谢表型研究吗？怎么做？
A：体外代谢速率低，确实意味着体内的代谢速率也很可能低，也可以不做，但同时需要注意的是体内代谢速率低，不代表代谢比例就一定低（比如在排泄速率更低的情况下），故仍需要尽可能搞清楚药物通过CYP酶代谢的具体亚型途径，除非有证据表明CYP酶并不是主要的代谢途径；技术上，如果原药的剩余量接近100%，确实不可能通过原药的代谢比率来进行判断，但可以通过代谢产物的生成量来判断，这种情况下，最好是有合成出来的主要的代谢产物，如果没有目标代谢产物的对照品，也可以采用代谢物鉴定中所找到的主要代谢产物离子对来进行粗略的定性检测。
Q：什么情况下需要考虑进行UGT表型研究，UGT表型研究怎么做？
A：在有证据（体外或体内数据）表明UGT是主要代谢酶的情况下需要考虑进行UGT表型研究。UGT表型研究只采用重组酶法来进行，因为目前学术界并无工人的UGT亚型特异性抑制剂可采用。但需要注意的是，CYP和UGT甚至包括其他的代谢酶，都可能同时是主要的代谢途径。
Q：有CYP3A5*1/*1 ,*1/*3 ,*3/*3这几个基因型的重组酶吗？
A：编码CYP3A5酶的基因在人群中存在多态性，但我们不做基因型的鉴定，也不是突变型的，是根据NCBI中查到的序列进行重组表达。
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