外周血单个核细胞（PBMC）分离方法及注意事项 2022-02-18

外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）和其他少量细胞。 1    原理 单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其它细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重超过1.080，单个核细胞的比重为1.070左右，血小板为1.030左右。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜，故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞，并进行适当的清洗，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC。 2    方法 1）  取新鲜抗凝全血，按照1：1比例加入1×稀释洗涤液，将血液进行稀释（以降低血液粘稠度），轻柔混匀，备用。 2）  向无菌离心管内加入适量的单个核细胞分离液，将稀释后的血样平铺到分离液液面上方（分离液：稀释全血=1：2），保持两液面界面清晰。 3）  800g，室温，离心 20min-30min（注：设置较慢的加速度和减速度，如果有十档，设为第三档）。 4）  离心结束后，吸弃血浆层，小心吸取PBMC层（即白膜层）并转移至15mL离心管中。离心结束后，管内液面从上至下依次为稀释血浆层、PBMC层、分离液层和红细胞层（见图1）。 图1 稀释外周血离心前后的分层状态图 5）  向离心管中加入10mL 的1×稀释洗涤液重悬细胞，250g，室温离心 10min ，弃上清。重复该步骤 1~2 次，即可用于后续试验。 3    注意事项 1）  不同种属动物单个核细胞的比重有一定差异，请选择合适的分离液进行PBMC的分离。 2）  血液新鲜程度是影响分离效果的关键因素，请尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离。 3）  为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 4）  为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

药物转运体的研究方法 2022-02-10

Methods for the study of drug transporters 李 聃, 盛 莉 , 李 燕 北京协和医学院药物研究所药物代谢室 活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室 位于细胞膜上的转运体是体内重要的功能性膜蛋白 , 在药物吸收、分布、代谢及排泄的动力学过程中发挥重要作用。 了解转运体的功能对阐明药物的体内药代动力学特征、药效及毒性具有重要意义。 正文 人体内参与药物跨膜的转运体种类众多 , 按底物跨膜转运方向可分为参与药物吸收和外排的两大类转运体。 介导药物进入细胞的转运体可将底物摄取至靶位以发挥药效, 属于可溶性载体 (solutecarrier, SLC), 寡肽转运体 (peptide transporters, PEPTs)、 钠非依赖性易化扩散转运体(sodium-independent facilitated diffusion transporters,GLUTs)、 有机阴离子 (organic anion transporters, OATs) 外排转运体： P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、 乳腺癌耐药蛋白 (breast cancer resistance protein, BCRP) 属于ATP结合盒转运体 (ATP binding cassette, ABC) 家族, 可利用水解ATP的能量对药物及内源性物质进行转运。 多种药物已被证明是转运体的底物或抑制剂。 左旋溶肉瘤素等抗肿瘤药也可抑制肿瘤细胞LAT的活性。 根皮苷、达格列净则可通过抑制SGLT,阻断近曲小管对葡萄糖的重吸收。 他汀类、青霉素、甲氨蝶呤、缬沙坦等属于OATP1B1的底物,而环孢素、沙奎那韦、利福平及某些黄酮类化合物可抑制OATP1B1的转运功能。 OCT2的典型底物还包括雷尼替丁、阿米洛利和普萘洛尔,甲腈咪呱、西替利嗪均可显著抑制OCT2的转运活性。 MRP的底物包括多种抗癌药如甲氨蝶呤、依托泊苷、米托蒽醌及血管紧张素受体拮抗剂,环孢素、依法韦仑、恩曲他滨可抑制MRP对底物的外排功能。 上述转运体可不同程度地影响药物的吸收、分布、排泄及药物相互作用。 因此,转运体在药物研究中的重要性日益引起关注。 体外模型 体外细胞模型 细胞模型在药物发现阶段可用于确定药物是否为单一或多个转运体的底物或抑制剂、药物转运机制及跨膜转运的限速步骤。 1.1 不含重组转运体的细胞系 Caco-2细胞模型被认为是目前最理想的体外吸收模型,可作为快速评估新药吸收和转运特性的方法。 Shan等采用Caco-2细胞作为药物肠道吸收模型,研究P-gp抑制剂粉防己碱(tetrandrine,Tet)对黄连素(berberine,BBR)的吸收促进作用。 Transwell小室模型可测定药物经细胞的跨膜转运,反映药物肠道转运的渗透性。 通常吸收较差药物(<1%)的Papp<1×10−7cm·s−1,吸收为1%～100%的药物Papp为0.1×10−6～1×10−6cm·s−1,而吸收良好药物的Papp>1×10−6cm·s−1。 结果表明,在癸酸钠(200mmol·L−1)作用下,ZMR的Papp值高于对照组6倍,肠道渗透性显著提高。 此模型应用于预测药物被动转运相关性最为理想,只有部分载体介导主动转运药物可以用该模型预测。 1.2 原代细胞 原代细胞分离后需适应培养环境,以确保细胞适度生长,转运体恰当表达及定位。 HepaRG虽然保留了原代肝细胞的许多特征,包括关键药物代谢酶和转运体,但在培养一段时间后会丧失代谢及转运能力。 体外评价模型能够长期保持转运及代谢活性十分重要,因此原代肝细胞相对于HepaRG细胞更具优势。 游离肝细胞培养技术是研究转运体功能的另一重要手段。 Ishiguro等采用大鼠游离肝细胞证实了OATP参与替米沙坦的肝摄取,该过程是Na+依赖性且可被OATP底物兼抑制剂牛黄胆酸盐、普伐他汀和地高辛所抑制,但不能被有机阳离子四乙胺所抑制,说明多种OATPs可能参与替米沙坦的转运,OCTs则不参与。 与肝灌流技术相比,该技术可利用同源肝细胞进行重复实验,即对照组与实验组来源于同一动物,重复性好。 与亚细胞组分相比,保持了完整细胞的结构,更接近体内环境。尽管具有以上诸多优势,由于失去肝小叶、肝内胆管等结构,游离肝细胞不能完全替代整体动物转运体功能的评价。 体外培养原代BMECs可保留体内细胞的主要特点,如OATP及P-gp表达丰富,能在体外融合成致密的单层细胞等,因此可用于体外BBB转运体的研究。 血管内皮细胞在人体多种生理病理过程中发挥重要作用,通常选用原代脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEs)进行转运研究。 1.3 三明治培养原代肝细胞模型 虽然原代肝细胞可模拟肝脏基本功能,然而传统方法培养的肝细胞会迅速丧失极性及代谢能力, 失去胆管网络, 难以模拟体内肝的小管外排功能。 培养几天后, 肝细胞形成完整胆小管网络并同时保持紧密连接, 且肝脏转运体正常表达并定位于恰当的膜区域, 可用于转运体功能研究。 因此, 通过在含Ca2+和无Ca2+条件下测定药物细胞蓄积量的差值可计算排入胆管的药量。 在P-gp抑制剂依克立达(GF120918)作用下两药的胆汁排泄率均减小, 且应用SCRH所得的胆汁清除率值与在体大鼠肝灌流、游离肝细胞实验所得数值基本吻合,由此确定P-gp在两药胆汁排泄中的作用。 通过比较有无调节剂的BEI和CLbile值可推断转运相互作用发生在基底侧还是胆小管膜, 进而阐明肝脏药物转运相互作用的潜在机制。 与目前常用的MDR1-MDCK、Caco-2等单层细胞模型相比,SCRH模型能更好地模拟体内环境,可同时考察转运体与药物代谢酶的相互作用。 1.4 转染细胞 转染细胞系可单独表达吸收和外排转运体,或者二者共表达。 构建过程包括将含目的基因片段的重组质粒转染至特定细胞,用G418进行筛选,挑选单克隆细胞后结合 Yang等分别用OAT4、OATP1A2、URAT1基因转染CHO及HEK293细胞,成功构建OAT4/CHO、OATP1A2/HEK293、URAT1/HEK293细胞模型, 研究3种转运体对底物全氟辛酸(pentadeca fluoro octanoic acid,PFO)的转运,发现OAT4和URAT1可参与PFO的吸收。 König等构建了MDCK-OCT1-MATE1、MDCK-OCT2-MATE1双转染细胞模型,并用相应的单转运体转染细胞作为对照,研究二甲双胍和甲基−苯基−吡啶阳离子(MPP+)的转运机制,证实OCT1、OCT2介导两个药物的摄取转运,而MATE1介导外排。 一般认为,单转染细胞通常缺乏内源性吸收或外排转运体,无法模拟药物分子跨膜转运的完整机制,而双转染细胞在一定程度上克服了这一缺陷。 对某些药物而言,药物相互作用的产生不仅来自转运体,而是药物代谢酶和转运体的共同作用,如外排转运体和CYP3A4协同降低共同底物的吸收。 双转染细胞系由于保留了转运体和代谢酶的高度协同作用,对转运体和药物相互作用的研究具有更高价值。 基于膜的体外模型 ATP水解法可用于研究某些底物和抑制剂与ABC转运体的相互作用。 此种分析方法简便易行, 可应用于高通量筛选, 批量分析与ABC转运体相互作用的化合物。 故该法一般不单独应用于ABC底物或抑制剂的筛选。 该模型将膜囊泡混悬于含药缓冲液中,模拟药物吸收,包括刷状缘膜囊泡(BBMV)、基底膜囊泡和外翻转囊泡模型。 将所得沉淀物重新混悬,得到囊泡,测定囊泡摄取的药物,模拟药物吸收。 BBMV和基底膜囊泡联合应用, 可以同时研究肠细胞顶侧膜和基底膜的转运。该方法实验时间短, 囊泡制备方便,适合新化合物早期高通量筛选。 囊泡外翻后, 转运体暴露在囊泡表面, 与药物共同温孵时, 转运体可以将药物转运到囊泡内, 测定囊泡内药物含量可反映转运体对药物的作用。 采用外翻转膜囊泡模型进行研究时, 分析体系需含有ATP再生系统以维持分析期内能量持续供应, 且应采用5'-AMP替代ATP的体系作为阴性对照。 此外, 药物直接作用于外翻转膜上的转运蛋白, 可检测药物的吸收而非外排, 计算吸收动力学参数, 用于目标转运体底物或抑制剂定量构效关系分析(quantitative structure activity relationship,QSAR)。 在对疏水性底物进行囊泡转运分析时,需先应用不同的排阻技术以减小背景干扰。 肾切片摄取模型 Liu等静脉注射顺铂诱导大鼠急性肾衰竭,应用肾切片模型研究JBP485改善急性肾衰竭的作用。 顺铂诱导大鼠给予JBP485后可降低肌酸酐、血尿素氮,恢复肾小球滤过率,促进毒性代谢产物排出。 肾切片模型可研究药物是否为肾脏转运体的底物,预测化合物的肾转运特点。 4 外翻肠囊模型是由刷状缘膜囊泡和体外小肠肠环培养技术发展而来。 分离得到的肠段可采用乳酸脱氢酶法或台盼蓝法对肠粘膜细胞活性进行评价。 Hamilton等应用外翻肠囊法对SGLT1进行了系统研究, 包括SGLT1的Na+依赖特性、抑制剂及Na+-K+-ATP酶在转运过程中的作用。 该方法实验条件易控,操作简单,经济实用且重复性好,被广泛应用于转运体转运机制、营养物质吸收及药代动力学的研究。 在体模型 在体器官灌流模型通过在灌流液中加入转运体的选择性抑制剂, 比较灌流液、组织器官或血浆中药物含量的差别, 考察转运体对药物的吸收或外排作用。 1 禁食大鼠胆管结扎并分离肠段,将插管与肠端相连并结扎,灌流管与插管连接后进行在体肠段灌流。 肠灌流可保持血液供应、肠道药物代谢酶的活性、神经及内分泌的完整性,可较好反映生理条件下药物在肠道吸收。 2 脑灌流模型用于研究药物经BBB及血眼屏障的转运机制,灵敏度极高,不但保持了器官的完整性、生理条件下的位置及状态,且避免了药物与血浆蛋白的结合及外围器官的代谢。 脑灌流模型手术完成后需以14C或3H标记的蔗糖进行短暂灌流,以检测BBB的完整性并计算血管容量。 灌流液中同时或单独加入P-gp、BCRP、MRP及OATP抑制剂的研究发现,P-gp及BCRP协同限制GLB入脑,另外可能还存在MRP4的外排转运,而OATP不参与GLB的转运。 在体肝灌流模型 You等采用大鼠在体肝灌流模型研究MTC-220在肝脏的转运机制, 当灌流液中加入OATP抑制剂利福平时, MTC-220的肝脏摄取率与对照组相比显著降低, 当灌流液中分别加入丙磺舒(MRP2抑制剂)、新生霉素(BCRP抑制剂)及维拉帕米(P-gp抑制剂)时, MTC-220的胆汁排泄率显著降低, 体内模型 基因敲除小鼠 mdr1a(−/−)小鼠限制药物脑部暴露量, 作用高于P-gp抑制剂伊维菌素100倍。 为证实P-gp及BCRP对共同底物的透过具有协同作用, Kodaira等将P-gp底物奎尼丁给予Bcrp(−/−)小鼠, BCRP底物丹曲林给予Mdr1a/1b(−/−)小鼠, 与野生型小鼠比较两药的脑、睾丸与血浆的浓度比(Cbrain/Cplasma,Ctestis/Cplasma)。 研究者进一步采用双基因敲除小鼠研究P-gp和BCRP共同底物埃替特罗、夫拉平度及米托蒽醌的外排作用, 3种底物在Mdr1a/1b(−/−)/Bcrp(−/−)小鼠体内的Cbrain/Cplasma及Ctestis/CplasmaMdr1a/1b(−/−)、Bcrp(−/−)小鼠有明显提高。 此外, 将各基因型缺陷小鼠的Cbrain/Cplasma及Ctestis/Cplasma分别与野生型进行比较,P-gp对共同底物的外排贡献大于BCRP。 ①可阐明生理条件下的转运体功能,如对主要血液−组织屏障的保护作用; ③可用于多转运体协同作用的研究。 已有研究者对Mdr1a、Bcrp及Mrp2基因敲除小鼠在小肠、肝、肾、脑组织的基因表达及病理学改变进行了系统研究。 因此, 在应用基因敲除小鼠进行转运体功能研究时, 基因敲除引起小鼠代偿性功能改变进而导致药物代谢动力学的变化需引起关注。 随着研究者对转运体功能研究的重视, 会有更多类型的转运体基因敲除动物模型出现,进一步促进药物转运的研究。 2 体内实验方法除采用普通动物与基因敲除动物作对比实验外, 也常用选择性抑制剂抑制转运体功能,达到“敲除”转运体的目的, 考察药物在抑制剂组和对照组动物体内吸收和代谢差别,从整体动物水平研究转运体对药物的作用。 结果显示,BCRP对TPT的外排能力是P-gp的3倍。 3 动物活体成像技术是在不损伤动物的前提下,应用影像学方法对生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性定量研究。 其中光学成像和核素成像的灵敏度和精确性极高,特别适合研究药物代谢和转运等生理过程,称为功能成像。 研究肿瘤细胞中BCRP及P-gp功能时,PET技术较为常用。 当给予抑制剂时,[11C]GF120918的摄取率显著提高,由此证实GF120918在肿瘤细胞中的转运是经P-gp和BCRP转运体所介导。 荧光技术采用荧光染料(包括荧光量子点)或荧光报告基因(GFP、RFP)等纳米标记材料进行标记,利用荧光蛋白质或染料产生的荧光、报告基因产生的生物发光可形成体内生物光源。 可见光成像具有无辐射、使用低能量、实时监测活体生物体内细胞活动和基因行为,对信号检测灵敏度高等优势。 结 语 本文将目前常用的转运体研究技术进行分类介绍并归纳各自优缺点(表1), 研究者在对某一转运体进行研究时需综合考虑各方面因素, 选取适合的方法。 随着新药研发新技术的出现、分子生物学及计算机技术的发展,会有更多、更高效、灵敏的转运体研究方法出现, 对了解新化合物的体内过程、结构修饰、转运体所介导的药物相互作用、提高药物生物利用度、降低药物不良反应及临床合理用药提供更为全面科学的依据。 来源：药学学报 IPHASE/汇智和源致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，主要产品包括ADME产品，空白生物基质，遗传毒性试剂，磁珠分选试剂盒，原代细胞，重组蛋白，抗体等。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

Ames试剂盒（细菌回复突变试验试剂盒） 2022-01-20

Ames试剂盒是公司自主研发的一体化试剂盒产品，内含有Ames试验所需的全部鼠伤寒沙门氏菌株（TA97、TA98、TA100、TA102/WP2uvrApKM101菌株和TA1535）及培养基、组氨酸生物素、S9等试剂。本试剂盒中菌株及诱导S9加入保护剂后于-80℃保存，经复溶后可直接使用，省去了诱导S9的制备、菌株鉴定和活化培养等时步骤和时间。 Ames试剂盒4菌版（TA97a、TA98、TA100、WP2uvrApKM101、TA1535） Ames试剂盒5菌版（TA97a、TA98、TA100、WP2uvrApKM101、TA1535） Ames预实验试剂盒（TA97a/TA98，TA100） Ames菌株鉴定试剂盒 微量波动Ames试验（Mini-Ames）试剂盒 试剂盒应用范围： ①化合物早期毒性筛选，早期毒性研究 ②药品，食品，化学品，医疗器械，化妆品等的遗传毒性试验 试剂盒优势 传统试验 周期长：培养基成分准备、诱导S9制备、菌株鉴定、菌株培养等耗费大量时间。 稳定性差：杂菌污染、活菌数不符合要求、实验试剂配置不准确都会导致实验失败。 Ames试剂盒 便捷：省去培养基成分准备、诱导S9制备、菌株鉴定、菌株培养等时间，可直接使用，大大缩短试验周期。 准确：本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，无杂菌污染，菌株特性与活菌数目以及诱导S9活性均符合Ames试验要求，实验结果准确、可靠、重现性高。 稳定：本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 Ames试剂盒产品手册 Ames 实验概述 沙门氏菌回复突变试验（亦称 Ames试验）于 1975年建立并不断发展完善，目前已被世界各国广为采用，已经成为毒理学实验室必需开展的重要实验项目。Ames实验用于检测待分析物质的致突变作用，该验灵敏、高效、检测范围广。 Ames 实验原理 Ames 试验利用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株，该缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长；假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌诱导回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变， 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的 S9混合液。 1. 诱导 S9 采用国际先进无菌冻干干燥工艺制成，实现了诱导 S9 酶活性的稳定保存，同时有效防止了细菌污染。实验时用 S9 反 应液溶解混匀。    2. 实验菌株采用先进工艺规模化制备，出厂前经过严格的质量检测，低温贮存条件确保了实验菌株的长期稳定性。实验时混 匀后即可直接使用，节省了菌株鉴定、活化处理以及菌液浓度调整等时间。      3. 实验阳性对照试剂种类覆盖整个 Ames 实验要求，在添加和不添加 S9 的情况下均可以诱导实验菌株呈现阳性反应。阳性对照 试剂采购自国际大品牌公司，按照 Ames 实验需求精准定量分 装，出厂前经过实验检测，阳性对照试剂的长期稳定性有质量 保证。 4. 底层培养基 VS、GS 以干粉形式提供，便于培养基长期稳定 保存。使用前只需添加蒸馏水灭菌处理即可，试剂瓶采用耐高 温材料，因此可以直接向试剂瓶中添加所需剂量的蒸馏水。 5. 顶层培养基 HB 冻干球采用先进无菌冻干干燥工艺制成，使 用前需先用灭菌蒸馏水溶解，然后用 0.22μm 滤膜过滤除菌。 试剂盒应用范围 本试剂盒应用范围非常广，可进行食品与饮用水、化学品、洗涤剂、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装 材料等遗传毒理学检测。 传统实验操作不足 周期长——培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株鉴定、菌株培养 等耗费大量时间。 稳定性差——杂菌污染、活菌数不符合要求、实验试剂配制不准 确等都会导致实验失败。 试剂盒优势 便捷—— 本试剂盒省去了培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株 鉴定、菌株培养等时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。 准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，无杂菌污染， 菌株特性与活菌数目以及诱导 S9 活性均符合 Ames 试验要求，实 验结果准确、可靠、重现性高。 稳定—— 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 试剂盒使用操作流程 1. 实验器材、试剂准备：三角瓶、5mL 或 15mL 试管、100μl 和1000μl 枪头、0.22μm 滤膜、注射器、平皿、二甲基亚砜、灭菌 蒸馏水等； 2. 设置待测物剂量，配制各剂量无菌待测物溶液； 3. VS、GS 培养基加水溶解并灭菌，配制底层培养基； 4. HB 球加灭菌蒸馏水溶解，充分混匀，然后过滤除菌； 5. 实验当天配制顶层培养基，2ml 分装，然后 45℃水浴保温； 6. 用无菌蒸馏水溶解 S9 复合物并配制 S9 反应混合液； 7. 开展 Ames 实验，将 2mL 顶层培养基+100μL 菌液+100μL 待测 物或阳性底物+500μL10% S9 混合液混匀，倾倒于底层培养基（实验室温度低时倾倒的顶层培养基易冷凝，可将底层培养基 放置于 37℃培养箱一段时间，然后再倾倒顶层培养基）； 8. 待顶层培养基冷凝后，将实验平皿放入 37℃培养箱，培养 48h后观察实验结果； 试验方法  试验方法主要是平板掺入法和预培养平板掺入法，具体操作如下： 1. 平板掺入法 a) 准备所需底层培养基平皿若干。 b) 融化顶层培养基分装于无菌小试管，每管2 mL，在45℃水 浴中保温。 c) 在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株菌液0.1 mL，混 匀；加受试物0.05 mL~ 0.2 mL（一般加入0.1 mL。需活化时 另外再加入10 % S9反应混合液 0.5 mL），再混匀，然后迅 速倾入底层培养基上。转动平皿，使顶层培养基均匀分布 在底层上，平放固化，37℃ 培养 48 h观察结果。 d) 另做一阳性对照、溶剂对照和未处理对照。阳性对照不加 受试物，只加标准诱变剂（即试剂盒阳性对照试剂，见表2）；溶剂对照加除受试物和标准诱变剂以外的所有试剂， 如溶剂二甲基亚砜等（光谱纯或分析纯）；未处理对照只 在培养基上加菌液；其他方法同上。 2. 预培养平板掺入法 预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定 是否进行预培养。在加入顶层琼脂前，先进行以下预培养步 骤：在试验中，将受试物（需活化时另加入10% S9反应混合 液）和菌液，在37℃中培养20min，或在30℃中培养30min，然 后再加2mL顶层琼脂，其他同上述平板掺入法。 试验设计及受试物的特殊处理 1) 剂量设计 决定受试物最高剂量的原则是受试物对试验菌株的毒性和受试物的溶解度。对于纯的化学物质，一般最低剂量为每平皿0.2 μg，最高剂量为 5 mg，或溶解度允许，或饱和浓度，或对细菌产生最小毒性浓度。对于毒性很低、摄入量很大的定型产品，可根据其溶解度和对细菌的毒性采用可能的最大剂量。每 种受试物在允许最高剂量下设4个（含4个）以上剂量，每剂量间隔不超过5倍，每个剂量应做三个平皿。 2) 溶剂 溶剂可选用水、二甲基亚砜或其他溶剂（溶剂剂量应限定在毒性剂量以下。以二甲基亚砜为例，平板掺入法每皿不超过0.1mL 溶剂；预培养平板掺入法每皿不超过0.01mL 溶剂）， 无论选用什么溶剂均应无诱变性。 3) 对照组的设置 试验应同时设有阳性物对照组、溶剂对照组和未处理对照，均 包括加S9和不加S9两种情况。 4) 受试物的特殊处理 若遇特殊受试物作非常规处理时应在报告中说明。对以下几种情况可作如下处理： a)  含组氨酸受试物：根据食品中测得的组氨酸含量若能诱发 回复突变率的增高可加设组氨酸平行对照组；或将检品经XAD-II树脂柱过滤洗脱预处理。 b)  食品包装材料及其制品成分：根据材料或制品的组成成 分，可分别采取过筛抽提、蒸发残渣等技术处理。 c)  挥发性受试物：可采用真空干燥器处理等方法。 d)  天然植物材料：可按植物化学方法制备粗制品或纯制品。 结果的判定 以直接计数培养基上长出回变菌落数的多少而定，如在背景生 长良好条件下，受试物组回变菌落数是溶剂对照回变菌落数的 两倍或两倍以上，并有剂量反应关系或至少某一测试点有可重 复的并有统计学意义的阳性反应，即可认为该受试物诱变试验 阳性。受试物经上述四个试验菌株测定后，只要有一个试验菌 株，无论在加S9或未加S9条件下为阳性，均可报告该受试物对 鼠伤寒沙门氏菌为致突变阳性。如果受试物经四个试验菌株检 测后，无论加S9和未加S9均为阴性，则可报告该受试物为致突 变阴性。 Ames 实验报道文献举例        广东省疾病预防控制中心通过 Ames 试验发现部分染发剂引起试验 菌株 TA97、TA98、TA100 回变率明显升高，提示部分染发类 产品具有致突变作用，可对健康产生危害。何冬梅等、中 国 卫 生检验杂志 2007,17,(11)。        人参与女贞子是临床上常见的有一定抗肿瘤效果的补益中药，在 Ames 试验中人参能抑制二氨基芴引起的 TA98 菌株回变菌落数的增加；女贞子能抑制叠氮钠引起的 TA100 菌株回变菌落数的增加，分别表现出抗移码型突变和抗碱基置换型突变的作用。倪娅等、中国保健 2009,17,(17)。生活饮用水经投加二氧化氯处理后对水中石油类污染物具有较 强的去除作用，可使水中有毒有害有致癌性的物质氧化降解为 毒性较小、无致癌作用的小分子物质，并且致突变活性明显降低，Ames 值由阳性转为阴性。高庆然等、工业用水与废水2001,6。        喹烯酮是我国自主研发的喹噁啉类一类新兽药，作为抗菌促生 长剂用于猪饲料中， Ames 试验表明喹烯酮对 TA97、TA98、 TA100 和 TA1537 加和不加 S9 在一定剂量下均为阳性。结果提 示，喹烯酮存在一定致突变毒性，应制定最高残留限量。张伟 等、毒理学杂志 2007,04。        Ames 试验表明煤和液化石油气（LPG）燃烧颗粒物均具有很强 的直接和间接致突变作用，主要致突变作用来源于硝基和胺基多环芳烃，两种颗粒物同时存在可加大致癌风险。闫洪涛等、 中国公共卫生 2007,04。        烷基酚聚氧乙烯醚（APES） 是一大类表面活性剂家族，广泛 用于家庭和工业的清洁产品，烷基酚类化合物是其降解产物， 其中对甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚、4-乙基苯酚、4-辛基苯酚、对壬基苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、1,3-二氯苯酚、2,4-二氯 苯酚、2,6-二氯苯酚、三氯苯酚和 2,3,5,6-四氯苯酚 12 种化合物 的 Ames 试验表明除 2,4- 二氯苯酚未诱发各菌株的阳性反应外，其余 11 种待测物均诱发了阳性反应,说明这 11 种苯酚类化 合物均具有致突变性。杨丽等、东北师大学报（自然科学版） 2003,01。        重组葡糖激酶作为一种生物技术药物具有明显的溶栓和抗凝效果，Ames 实验结果显示重组葡糖激酶对试验菌株 TA97 、TA98、TA100 和 TA102 无诱发回变作用。刘永学等、癌变·畸变·突变 2004,9。 常见问题及原因分析 1、自发回变数显著低于标准 原因：a. 试剂盒保存条件不合适，菌株失活或营养成分降解；b.培养基配制操作过程中组氨酸、生物素添加量低；c.操作过程中添加菌液时顶层培养基温度过高； 2、自发回变数显著高于标准 原因：a. 培养基配制操作过程中组氨酸、生物素添加量高；b.培养皿经环氧乙烷消毒不彻底或环氧乙烷有残留； 3、阳性底物诱变菌落数偏离标准范围 原因：a. 阳性底物溶解不彻底或未充分混匀；b. 阳性底物添加量不准确；c. 试剂盒保存条件不合适或过期，阳性底物降解或 S9失活；d. 操作过程中添加菌液时顶层培养基温度过高； 4、待测物诱变菌落数非常低或没有菌落 原因：a. 待测物或待测物溶剂对细菌生长有毒性；b. 试剂盒保存条件不合适或过期，阳性底物降解或 S9 失活； c. 操作过程中添加菌液时顶层培养基温度过高； 5、菌落分布不均匀，集中偏向一侧。原因： 倒底层或顶层培养基时平皿未水平放置； 6、顶层或底层培养基凝固不充分或滑出平皿 原因：a. 顶层或底层培养基中琼脂粉含量低；b. 顶层培养基中加入的溶剂或待测物酸化，导致凝胶不充分； 7、如何判断 Ames 实验结果是否为假阳性 将经受试物和阳性对照物处理的 Ames 菌落进行增菌培养后接种于无组氨酸的培养基上,观察比较细菌的生长情况。如果经受试 物处理的菌株不能生长在无组氨酸的培养基中,而经阳性对照物处 理的菌株则可以生长在无组氨酸的培养基上,则说明经受试物处理 的菌株没有发生突变，试验中所观察到的菌落数增加是假阳性。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法 2022-01-19

Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法 1 概述 1.1 药物代谢研究简介 药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。 药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物的检测具有一定的困难。体外代谢法在短时间内可以得到大量的代谢产物，且代谢条件可控，代谢体系比较“干净”，代谢物易于分离、提取，有利于代谢途径研究及代谢产物结果的确定等，因而，体外代谢法具有突出的优越性。 由于肝脏是药物代谢的主要场所，体外代谢模型多以肝脏为基础。目前，研究体外代谢方法主要有：肝微粒体体外温孵法、重组P450酶体外温孵法、肝细胞体外温孵法、肝脏离体灌流法和肝切片法。其中，肝微粒体体外温孵法与其他体外代谢方法相比，酶制备简单，代谢过程快，重现性好，易大量操作，同时可用于药物代谢酶的抑制及体外清除等方面的研究，因而在实际工作中应用较为普遍。 1.2 药物代谢 药物代谢，又称药物的生物转化（biotransformation），是指药物经过体内吸收、分布之后，在药酶的作用下经历化学结构变化的过程，是药物从体内消除的主要方式之一。药物在体内的生物转化，分为Ⅰ相代谢反应和Ⅱ相代谢反应。 肝脏是药物代谢的重要器官，是机体进行生物转化的主要场所，含有参与药物代谢Ⅰ相代谢和Ⅱ相代谢的各种酶。在肝脏中，参与药物代谢的Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶中以P450酶最为重要，它是一种以铁卟啉为辅基的蛋白质。P450酶存在明显的种属、性别和年龄的差异，其中以种属差异表现最为明显，不同种属的P450同工酶的组成不同，因此药物在不同种属的动物和人体内的代谢产物可能是不同的。 1.3 药物的Ⅰ相代谢 药物在Ⅰ相代谢反应中主要发生氧化、还原和水解的反应，经过Ⅰ相代谢反应，药物可能带有一些极性基团，如羟基、羧基等。 氧化反应是最多见的第Ⅰ相反应，单加氧酶系是氧化异源物最重要的酶，单加氧酶主要存在于滑面内质网的微粒体中，能催化烷烃、烯烃、芳烃和类固醇等多种物质进行氧化。由细胞色素P450、NADPH+H+、NADPH-细胞色素P450还原酶（以FAD为辅基的黄酶），催化基本反应为： RH+O2+NADPH+H+→ROH+NADP++H2O 单加氧酶能直接激活氧分子，使其中一个氧原子直接加入底物分子中形成羟化物或环氧化物，另一个氧原子则被NADPH还原为水。由于一个氧分子发挥了两种功能，故单加氧酶系又称为混合功能氧化酶；又因底物的氧化产物是羟化物，所以又称为羟化酶。加单氧酶的反应见图1：                      图1 加单氧酶的反应 肝细胞微粒体内存在的还原酶主要有硝基还原酶和偶氮还原酶，是第Ⅰ相反应的主要还原酶，能使硝基化合物和偶氮化合物还原生成胺类（见图2）。                    图2 硝基苯和偶氮苯的还原反应 肝微粒体中含有多种水解酶，如酯酶、酰胺酶、糖苷酶等，可分别催化酯类、酰胺类、糖苷类化合物的水解（见图3），以降低或消除其生物活性。                        图3 乙酰水杨酸的水解反应   2 Ⅰ相代谢稳定性实验原理 肝药酶CYP即细胞色素P450氧化酶（CYP450），属于单加氧酶（momooxygenase），也称肝微粒体混合功能氧化酶，多位于内质网和线粒体内壁上，参与药物、致癌物、类固醇激素和脂肪酸等多种内、外源性物质代谢。肝药酶CYP氧化还原酶（POR）是所有肝微粒体酶的唯一电子供体，通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）将电子传递给CYP450酶，CYP450酶得到电子后再与底物发生氧化还原反应，从而发挥代谢活性。 肝微粒体中包含了大部分Ⅰ相酶，其中最重要的是以CYP450为主要成分的微粒体混合功能氧化酶系统，在用肝微粒体进行研究时，如加入相应的辅助因子NADPH，则可重组体外代谢体系，从而通过体外温孵法进行Ⅰ相代谢稳定性研究。 3 肝微粒体体外温孵法实验方法描述 肝微粒体体外温孵法是采用肝微粒体，辅以NADPH再生系统，在体外模拟生理环境条件进行代谢反应，经过一定时间的反应后，采用HPLC、HPLC-MC和HPLC-MC/MC测定温孵液中原型药物和其代谢产物，并对代谢产物进行初步的分析和鉴定的方法。 3.1 肝微粒体制备 微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构，是异质性的集合体。它包含内质网膜和核糖体两种基本成分，在体外实验中具有蛋白质合成、蛋白质糖基化和脂类合成等内质网的基本功能。目前，制备肝微粒体常用的方法是差速离心法。具体制备流程见下图（图4）：                                                           图4 肝微粒体制备流程图 3.2 体外孵育体系的建立 Ⅰ相代谢稳定性研究的肝微粒体体外孵育体系，是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，在模拟生理温度及生理环境的条件下进行生化反应的体系。 推荐使用的孵育体系为：每个孵育体系总体积为200 µL，体系包括0.1M PH 7.4 的磷酸盐缓冲液，NADPH再生系统（1mM NADP，5 mM的6-磷酸葡萄糖，1 U/mL 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，3.3 mM的氯化镁）；0.5 mg/mL的肝微粒体蛋白；合适浓度的待测物，于37°C水浴孵育，每个样品平行3次，以不包含NADPH发生系统的样品作为阴性对照。于预设的反应时间点，如0，5，10，15，30，60 min后加入等体积预冷的乙腈终止反应。 3.3 原型药物或代谢产物的检测 采用HPLC、HPLC-MC和HPLC-MC/MC测定温孵液中原型药物和其代谢产物。图5为采用LC-MS/MS测定药物在人、犬和大鼠肝微粒体中的代谢情况，从图上可知，药物在三种肝微粒体中均存在明显代谢，但不同种属间又存在显著差异。                                                    图5药物在人，犬，大鼠肝微粒体中的代谢情况 4 汇智泰康/汇智和源Ⅰ相代谢稳定性试剂盒简介 北京汇智泰康/汇智和源针对药物代谢研究的需要，以肝微粒体体外温孵法为指导，开发了一款专门用于Ⅰ相代谢稳定性研究的试剂盒，该产品可直接用于药物的Ⅰ相代谢稳定性研究，省去了肝微粒体制备和试剂配制的繁琐过程，大大缩短了实验周期，且试剂盒各组成成分经过严格的质量检测，符合Ⅰ相代谢稳定性研究试验要求，实验结果准确、可靠、重现性好。 4.1 产品说明 本产品提供了药物Ⅰ相代谢研究用到的肝微粒体、NADPH再生系统及其它组分，可直接用于药物Ⅰ相代谢稳定性的研究。本产品可提供肝微粒体有：人肝微粒体、恒河猴肝微粒体、比格犬肝微粒体、大鼠肝微粒体和小鼠肝微粒体，可根据实际需求，选择不同种属的肝微粒体。 4.2 试剂盒优势 便捷——本试剂盒省去了肝微粒体制备和试剂配制时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。 准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。 稳定—— 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 4.3 产品组成 50反应/盒，200μL/反应。 产品名称 规格 数量 A液（20×） 600μL /支 1支 B液（100×） 120μL /支 1支 肝微粒体（20mg/mL） 300μL /支 1支 阳性底物（200×） 50μL /支 1支 0.1M PBS缓冲液 12mL/瓶 1瓶 4.4 产品使用说明 本产品需于-70℃冰箱冷冻保存，切记避免反复冻融。试验具体操作如下： 4.4.1 试验组 1）冰浴融化试剂盒各组分，置于冰上待用； 2）除微粒体外，将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀，于37℃预孵育5min； 例：200μL孵育体系配制： 名称 加入量（μL） A液(20×) 10 B液(100×) 2 肝微粒体（20mg/mL） 5 受试物（200×） 1 0.1M PBS缓冲液 182 注：a.体系中有机溶剂加入量不得大于1%。     b.若实际需要n个孵育体系，则需配置n＋1个体系。 3）将以上混合液195μL/管分装至1.5mL离心管中，于37℃水浴中保温， 5μL/反应加入肝微粒体，吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应，使用秒表计时； 4）于设定孵育时间点，向孵育体系中加入200μL预冷的乙腈终止反应（预冷乙腈：孵育体系体积=1:1）。 4.4.2 对照组 1）阳性对照组：将受试物换为阳性底物； 2）阴性对照组：不加A液、B液； 3）空白对照组：只包含底物和PBS缓冲液。 4.5 运输条件 干冰运输。 4.6 使用注意事项 1）验开始前，请自行准备1.5mL离心管、不同规格枪头、乙腈、37℃水浴锅等。 2）产品仅供科研使用，不能用于人体及动物的治疗或临床诊断。 3）用前，需于冰浴条件下解冻并混合均匀。 4）-70℃冰箱冷冻保存，切勿反复冻融。 5)用过程中，也可根据实际实验需求调整各组分的加入量。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

Ⅱ相代谢稳定性研究原理及实验方法 2022-01-14

Ⅱ相代谢稳定性研究原理及实验方法 1 概述 1.1 药物代谢研究简介 药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。 药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物的检测具有一定的困难。体外代谢法在短时间内可以得到大量的代谢产物，且代谢条件可控，代谢体系比较“干净”，代谢物易于分离、提取，有利于代谢途径研究及代谢产物结果的确定等，因而，体外代谢法具有突出的优越性。 由于肝脏是药物代谢的主要场所，体外代谢模型多以肝脏为基础。目前，研究体外代谢方法主要有：肝微粒体体外温孵法、重组P450酶体外温孵法、肝细胞体外温孵法、肝脏离体灌流法和肝切片法。其中，肝微粒体体外温孵法与其他体外代谢方法相比，酶制备简单，代谢过程快，重现性好，易大量操作，同时可用于药物代谢酶的抑制及体外清除等方面的研究，因而在实际工作中应用较为普遍。 1.2 药物代谢 药物代谢，又称药物的生物转化（biotransformation），是指药物经过体内吸收、分布之后，在药酶的作用下经历化学结构变化的过程，是药物从体内消除的主要方式之一。药物在体内的生物转化，分为Ⅰ相代谢反应和Ⅱ相代谢反应。 肝脏是药物代谢的重要器官，是机体进行生物转化的主要场所，含有参与药物代谢Ⅰ相代谢和Ⅱ相代谢的各种酶。UGT家族是人体内仅次于CYP450家族的第2大药物代谢酶。UGT介导的葡萄糖醛酸结合代谢不仅会显著影响药物的口服生物利用度和药物的体内药动学过程，同时还与一些临床药物-药物相互作用、药物-草药相互作用、药物-食物相互作用，以及高胆红素血症、癌症、自身免疫性肝炎等多种疾病的发生发展密切相关。 UGT催化的葡萄糖醛酸化代谢反应是以尿苷5’-二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）为葡萄糖醛酸的供体将一分子的葡萄糖醛酸转移到含有羟基、羧基、氨基、巯基以及酸性碳原子等基团的脂溶性小分子底物上。葡萄糖醛酸和小分子底物的结合使这些脂溶性小分子底物的水溶性得到改善，进而更容易被排出体外。 1.3药物的Ⅱ相代谢 药物的Ⅱ相代谢，又称结合反应，是药物在Ⅱ相代谢反应中与一些内源性的物质（如葡萄糖醛酸、甘氨酸、硫酸等）结合或经甲基化、乙酰化排出体外。药物的结合反应，常常使其转化为无活性的代谢物，且极性增加，以便药物排出体外。 药物的结合反应包括葡萄糖醛酸结合、硫酸化、乙酰化、甲基化、谷胱甘肽结合、氨基酸结合及缩合反应等。葡萄糖醛酸结合反应是体内生物转化最重要、最普遍的结合反应。葡萄糖醛酸基的直接供体是尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）（见图1）。                                                                              图1 葡萄糖醛酸结合反应     葡糖醛酸基转移酶（UGT）催化的葡萄糖醛酸化代谢反应是以尿苷5’-二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）为葡萄糖醛酸的供体，将一分子的葡萄糖醛酸转移到含有羟基、羧基、氨基、巯基以及酸性碳原子等基团的脂溶性小分子底物上，葡萄糖醛酸和小分子底物的结合使这些脂溶性小分子底物的水溶性得到改善，进而更容易被排出体外。 例（图2）：                              图2α-D-UDP-葡糖醛酸和异源物的结合反应 例（图3）： 图3 苯甲酸的葡萄糖醛酸结合反应 一般来说，药物先进行Ⅰ相反应进行转化，如果极性依然较弱，则会启动Ⅱ相反应，但有些药物可直接进行Ⅱ相反应。 2 实验原理 Ⅱ相代谢，又称结合反应，指Ⅰ相代谢产物或原型药物在酶的影响下与内源性小分子发生结合，使药物毒性、活性降低或极性增加而易于排出的反应。在药物的Ⅱ相代谢中，与葡萄糖醛酸的结合反应最为常见，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）进行反应，形成葡萄糖苷酸，使其水溶性增加，易于排出体外。因此，在体外，如若加入肝微粒体和UGT系统，便可重建Ⅱ相代谢体系，从而进行Ⅱ相代谢稳定性研究。 3 肝微粒体体外温孵法实验方法描述 肝微粒体体外温孵法是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA），在体外模拟生理环境条件进行代谢反应，经过一定时间的反应后，采用HPLC、HPLC-MC和HPLC-MC/MC测定温孵液中原型药物剩余含量的方法。 3.1 肝微粒体制备 微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构，是异质性的集合体。它包含内质网膜和核糖体两种基本成分，在体外实验中具有蛋白质合成、蛋白质糖基化和脂类合成等内质网的基本功能。目前，制备肝微粒体常用的方法是差速离心法。具体制备流程见下图（图4）： 图4 肝微粒体制备流程图 3.2 体外孵育体系的建立 Ⅱ相代谢稳定性研究的肝微粒体体外孵育体系，是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA），在模拟生理温度及生理环境的条件下进行生化反应的体系。 推荐的孵育体系为：每个孵育体系总体积为200 µL，体系包括0.1M PH 7.4 的磷酸缓冲液，NADPH发生系统（1mM NADP，5 mM的6-磷酸葡萄糖，1 U/mL 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，3.3 mM的氯化镁），UGT孵育系统（5 mM UDPGA，5 mM D-葡萄糖二酸-1.4-内酯，50μg/mg蛋白的丙甲菌素），0.5 mg/mL的肝微粒体蛋白，合适浓度的待测物，于37°C水浴孵育，每个样品平行3次，将待测物换为7-羟基香豆素，作为阳性对照， 阴性对照组分三组：a.只加UDPGA；b.只加A液、B液；c.不加UDPGA、A液、B液。于预设的反应时间点，如0，5，10，15，30，60 min后加入等体积预冷的乙腈终止反应。 3.3 原型药物检测 采用HPLC、HPLC-MC和HPLC-MC/MC测定温孵液中原型药物的剩余含量。 4 汇智和源Ⅱ相代谢稳定性试剂盒简介 汇智泰康/汇智和源针对药物代谢研究的需要，以肝微粒体体外温孵法为指导，开发了一款专门用于Ⅱ相代谢稳定性研究的试剂盒，该产品可直接用于药物的Ⅱ相代谢稳定性研究，省去了肝微粒体制备和试剂配制的繁琐过程，大大缩短了实验周期，且试剂盒各组成成分经过严格的质量检测，符合Ⅱ相代谢稳定性研究试验要求，实验结果准确、可靠、重现性好。 4.1 产品说明 本产品提供了药物Ⅱ相代谢研究用到的肝微粒体、NADPH再生系统、UGT孵育系统及其它组分，可直接用于药物Ⅱ相代谢稳定性的研究。本产品可提供肝微粒体有：人肝微粒体、恒河猴肝微粒体、比格犬肝微粒体、大鼠肝微粒体和小鼠肝微粒体，可根据实际需求，选择不同种属的肝微粒体。 4.2 试剂盒优势 便捷——本试剂盒省去了肝微粒体制备和试剂配制时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。 准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。 稳定—— 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 4.3 产品组成     50反应/盒，200μL/反应。 产品名称 规格 数量 A液（20×） 600μL /支 1支 B液（100×） 120μL /支 1支 肝微粒体（20mg/mL） 300μL/支 1支 UDPGA（50mM） 1.1mL/支 1支 丙甲菌素（250μg/mL） 1.1mL/支 1支 D-葡萄糖二酸-1.4-内酯（50mM） 1.1mL/支 1支 阳性底物（200×） 50μL /支 1支 0.1M PBS缓冲液 10mL/瓶 1瓶 4.4 产品使用说明 本产品需于-70℃冰箱冷冻保存，切记避免反复冻融。试验具体操作如下： 4.4.1 试验组 1）冰浴融化试剂盒各组分，置于冰上待用； 2）除微粒体外，将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀，于37℃预孵育5min； 例：200μL孵育体系配制： 名称 加入量（μL） A液(20×) 10 B液(100×) 2 UDPGA（50 mM） 20 丙甲菌素（250μg/mL） 20 D-葡萄糖二酸-1.4-内酯（50 mM ） 20 肝微粒体（20mg/mL） 5 受试物（200×） 1 0.1M PBS缓冲液 122 注：a.体系中有机溶剂加入量不得大于1%。     b.若实际需要n个孵育体系，则需配置n＋1个体系。 3）将以上混合液195μL/管分装至1.5mL离心管中，于37℃水浴中保温， 5μL/反应加入肝微粒体，吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应，使用秒表计时； 4）于设定孵育时间点，向孵育体系中加入200μL预冷的乙腈终止反应（预冷乙腈：孵育体系体积=1:1）。 4.4.2 对照组 1）阳性对照组：将受试物换为阳性底物； 2）阴性对照组分三组：a.只加UDPGA；b.只加A液、B液；c.不加UDPGA、A液、B液； 3）空白对照：只包含底物和PBS缓冲液。 4.4.3 运输条件     干冰运输。 4.4.4 注意事项 1）试验开始前，请自行准备1.5mL离心管、不同规格枪头、乙腈、37℃水浴锅等。 2）本产品仅供科研使用，不能用于人体及动物的治疗或临床诊断。 3）使用前，需于冰浴条件下解冻并混合均匀。 4）于-70℃冰箱冷冻保存，切勿反复冻融。 5）在使用过程中，也可根据实际实验需求调整各组分的加入量。 6）D-葡萄糖二酸-1.4-内酯为葡萄糖醛酸结合物的水解抑制剂，可根据实际需求选择是否加入。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

人CD3+T淋巴细胞阳性分选原理及注意事项 2022-01-14

人CD3+T淋巴细胞阳性分选原理及注意事项 一、细胞分选方法概述 细胞学研究中一个很重要的课题就是细胞的分离纯化，尤其是需要对某种特定的细胞进行功能研究，如对细胞培养上清液通过ELISA分析检测细胞因子、细胞共培养检测细胞功能等，都需要得到高纯度的目的细胞。因此，高效地分离所需要的目的细胞是进行细胞功能研究的先决条件。 细胞分选（cell sorting）是指根据细胞所具有的特性把某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术，它是对某一特定细胞进行生化分析和功能分析的前提和基础。常用的细胞分选方法主要有两大类：一类是基于细胞物理性质的密度梯度离心法（Density gradient centrifugation），另一类是基于免疫识别特性的方法，包括荧光激活细胞分选方法（Fluorescence-activated cell sorting，FACS）和磁性激活细胞分选法（Magnetic-activated cell separation，MACS）。 密度梯度离心法是基于不同的细胞群之间存在沉降系数差异的原理建立起来的，在一定的离心力的作用下，不同种类的细胞会以各自不同的速度沉降，在密度梯度不同的区域上会形成区带。这种方法简单易行，但此种方法分离所得到的细胞纯度较低，且细胞表面的标志不明确，特异性较差，目前使用较少。 流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是20世纪60年代后期发展起来的一种利用流式细胞仪（Flow cytometer）进行快速定量分析细胞亚群的物理化学特性，根据这些物理化学特性精确分选细胞的新技术，FCM主要包括流式分析和流式分选两部分。FACS最初于1972年提出，是指荧光驱动的细胞分选新技术，即利用分选型流式细胞仪分选标记有荧光素偶联抗体的细胞样品，通过荧光系统区分目的细胞和非目的细胞。流式细胞仪通过接受激光照射后液流内细胞的散射光信号和荧光信号反映细胞的物理化学特性，如细胞的大小、颗粒度以及抗原分子的表达情况等，目前已被广泛应用于生命科学及其相关领域的基础研究。流式细胞分选被认为是细胞分选的“金标准”，它分选所得的细胞纯度高、回收率高、且操作环境为全封闭型，不易被污染。但是，该方法所需设备比较昂贵，耗时，且需要高水平的技术支持以及专业的操作人员；且该方法在一段时间内只能分选一个细胞样品，若试验需要从不同的样品中分选目的细胞时这种方法不可行；同时，由于FACS对细胞刺激较大，因此对分选出的细胞活性有较大影响。    磁性细胞分选（MACS）是20世纪70年代发展起来的，是用结合有抗体的免疫磁珠与样品细胞进行孵育，表达有相应抗原的细胞就会特异性的结合在包被有抗体的免疫磁性微粒上，当体系缓慢的经过磁场时，带有磁珠的细胞就会滞留在磁铁上，而非目的细胞由于未结合磁珠仍存在与混合细胞悬液中，从而达到分离纯化细胞的目的。MACS法是一种相对高效简便的细胞分选方法，所需设备简单，只需一块专用磁铁即可进行分选，操作较为简单，对操作人员的技术要求也不高，一般实验室都可进行磁性分选。磁性分选只是让细胞处于一个低磁场中，基本可以忽略对细胞的影响，分离得到的细胞具有较高的复苏率及细胞活性，对于下游应用影响较小，在保持细胞活性方面优于流式分选。磁性分选因其高灵敏度、高纯度、易操作、对目的细胞刺激较小等特性成为了细胞分选的首选方法，具有潜在的应用前景。 二、免疫磁性细胞分选 2.1 原理 磁性细胞分选是基于免疫学中抗原抗体之间特异性结合的原理进行的。以磁性微粒作为载体，对其进行抗体或亲和配体包被，形成免疫磁性复合微粒，当其与混合细胞孵育后，磁性微粒表面抗体会与细胞表面的抗原决定簇发生抗原抗体的特异性反应，使得细胞被磁性复合微粒标记。在外加磁场的作用下，抗体与磁珠相连的细胞会因磁珠的磁性而滞留在磁场中，而不表达此抗原的细胞因不能与磁珠表面的特异性抗体结合而没有磁性，不能够在磁场中滞留，从而使目的细胞与非目的细胞分开，得到较高纯度的目的细胞。   图1 免疫磁性细胞分选原理示意图 2.2 免疫磁性细胞分选系统的分类 根据不同的分类标准，可以将免疫磁性细胞分选系统分为不同种类。 2.2.1 依据所标记细胞的不同分类 根据分选过程中所标记细胞类型的不同将免疫磁性细胞分选系统分为阳性分选、阴性分选和复合分选。 阳性分选（IPHASE人CD3+T细胞阳性分选试剂盒），即将目的细胞亚群直接从细胞悬液中分离出来。通过磁珠包被目的细胞的特异性抗体与混合细胞悬液孵育，在抗原抗体发生特异性结合后，通过磁分离方式，将目的细胞分离出来。 阴性分选，即从多细胞悬液中分离去除非目的细胞而得到目的细胞的一种方法。此方法的优点在于整个分选过程中目的细胞都未与磁珠（IPHASE SA磁珠）结合。由于抗原抗体的结合可能会引起细胞膜表面的信号传递，因此，此法具有较大的优势。但同时此方法也有不足之处，当靶细胞的细胞数所占细胞比例较小时，分选过程中存在的非特异性吸附会直接导致目的细胞的损失，此外，非目的细胞未被充分去除等，都会使得细胞的分选效率和分选纯度较低。 复合分选是指联合使用两种以上的分选策略进行分选，这种方法主要用于细胞亚群的分选或者想要分离得到高纯度的稀有细胞。 2.2.2 依据分选方法的不同分类     根据分选方法的不同可以将免疫磁性细胞分选分为直接分选法和间接分选法。 直接分选法是指将抗体或者亲和配体直接包被在磁性颗粒上，形成免疫磁性复合微粒，将其与多细胞悬液混合孵育之后，目的细胞会特异性的结合在免疫磁珠上，在外加磁场作用下，带有磁珠的目的细胞会滞留在磁场中，而非目的细胞则会被去除。 间接分选法分选细胞引入了二抗，即将目的细胞首先与对应的一抗孵育，激活细胞，之后清洗出去未结合的一抗，然后加入预先包被有二抗的磁性颗粒与活化后的细胞孵育，一抗与二抗之间的相互作用会导致磁粒结合在目的细胞上，同样在磁场作用下滞留目的细胞，达到分选的目的。 2.2 免疫磁性细胞分选系统的组成 免疫磁性细胞分选系统主要有磁性微粒、待标记抗体、磁性分离器（磁力架）、缓冲体系等组成。其中，磁性微粒的选择是分选成败的关键。 磁性微粒是指具有磁性或超顺磁性的粒子、磁性胶质体、磁性脂质体等。较为常见的磁性物质为Fe3O4或γ-Fe2O3磁性微粒；也有二氧化铬和铁素体的磁性微粒。应用于细胞分选的磁粒（IPHASE SA磁珠）具有非常严格的标准，其化学性质必须稳定，分散性好，在细胞悬液中不团聚，去掉外加磁场后没有磁滞现象，且不能吸附非特异性细胞，磁粒储存过程中亲和配体不能掉落，分选过程中可迅速、完全的被磁性分离，并可最大限度地减少细胞的吞噬作用。 磁性微粒的粒径大小对于细胞分选具有很关键的作用，因为粒径直接决定了磁粒的物理性质与可操作性。粒径较大的磁粒（>1μm）和粒径较小的磁粒（50~200nm）在细胞分选中都有广泛的应用。在某些情况下，不同的实验要求需要使用不同特性的磁粒。磁粒粒径的大小与其标记细胞的能力有很大关系，粒径大的磁粒可以负载更多的标记细胞接受部位。并且,细胞分选过程中，标记了较大磁粒的细胞，更容易被磁性分离器吸附，对磁性分离器的要求较低，简单、便宜、磁场强度较低的的磁分离器就可以满足要求。标记物或小分子标记物标记的粒径小的磁粒，却需要昂贵高强度的磁性分离器才能成功分选靶细胞。 2.3 免疫磁性细胞分选的过程 磁性细胞分选过程分为磁性标记及磁性分离两个过程。从复杂样品中分选靶细胞的流程大致分为三个步骤： 第一步，磁性标记物与含有靶细胞的细胞悬液混合孵育。孵育过程中，靶细胞与标记物相互作用，通过磁性分离把磁性标记物-靶细胞偶联产物与其它细胞分离。 第二步，清洗磁性标记物-靶细胞复合物，去除杂质。在这个过程中，可直接将磁性复合物-靶细胞复合物用来进行细胞培养，也可以裂解细胞，通过色谱分析、电泳或等方法分析细胞内容物。 第三步，磁性标记物与靶细胞的分离、移除。将磁性标记物与靶细胞分开，通过磁性分离去除磁性标记物，释放靶细胞，以便后续实验的进行。 2.4 免疫磁性细胞分选应用 作为细胞生物学研究的前提和基础，细胞分选技术已经得到了广泛的应用。随着细胞分选技术的不断发展，免疫磁性细胞分选技术已越来越受到研究者的的认可，目前已有许多商业化的试剂盒和分选磁珠（IPHASE SA磁珠）应用于细胞亚群的分选。最常见的为从人的外周血中分离细胞亚群，如B淋巴细胞、T淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、自然杀伤细胞等。 2.5 免疫磁性细胞分选效果的评价 细胞分选效果的评价指标主要包括分选纯度和分选得率。 分选纯度是指被分选出所有细胞中目的细胞所占的百分比。 分选得率是指被分选出来的细胞数与原混合细胞悬液中该种目的细胞数的百分比。 三、人CD3+T淋巴细胞免疫磁性细胞分选 3.1 CD3+T淋巴细胞概述 免疫细胞（immune cell）是白细胞的俗称，包括淋巴细胞和各种吞噬细胞等，也特指能识别抗原、产生特异性免疫应答的淋巴细胞等，淋巴细胞是免疫系统的基本成分。 淋巴细胞包括T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD3-CD19+）、NK细胞（CD3-CD16+CD56+），其中T淋巴细胞是淋巴细胞的主要组成。 T淋巴细胞是胸腺依赖淋巴细胞（thymus dependent lymphocyte），简称T细胞。CD3+T淋巴细胞代表全T淋巴细胞，包括辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。 3.2人CD3+T淋巴细胞分选试剂盒简介 IPHASE/汇智和源顺应市场需求，推出了可用于人CD3+T淋巴细胞分选的试剂盒，助力于生命科学的研究。根据分选样品的不同，分为适用于人PBMC样品分选和适用于人全血样品分选的两种试剂盒。试剂盒操作简单便捷，各成分对细胞无毒性，且可实现高纯度细胞分离的目的，为下游实验提供便捷。 3.3 试剂盒特点 l 便捷性 只需一步操作，即可实现高纯度细胞分选。 l 高效性 分选得到目的细胞最短只需15min。 l 高纯度 细胞分选纯度可达95%以上。 l 高活性 细胞分选后目的细胞存活率高。   图1 图1为使用人CD3+T细胞阳性分选试剂盒分离人全血后，使用克隆号为HIT3a的人CD3-FITC流式抗体进行染色后，经流式细胞仪分析结果。左图为未经分选流式图；右图为经阳性分选后的流式图。 3.4试剂盒原理 采用免疫磁珠阳性分选的方法，利用偶联于磁性微粒上人CD3单克隆抗体的高度特异性，使磁珠特异性结合PBMC（人外周血单个核细胞或脐带血单个核细胞）中的CD3+ T细胞，通过外加磁场的作用，使得CD3+ T细胞得以滞留在磁场中而被分离出来。 4.3试剂盒组成 产品组成 Human CD3 Magnetic Beads 200test 50mL 500mL

血浆蛋白结合率平衡透析装置——ADME 2022-01-13

药物血浆蛋白结合率（plasma protein binding, PPB）是药物在动物体内重要的药理学参数之一，影响着药物体内游离浓度进而影响药物的处置过程。药物在进入血液后与血浆蛋白会有不同程度结合，血液中游离药物的比例会影响其在体内吸收、分布、代谢和排泄的过程，与血浆蛋白结合的药物可能会有更长的半衰期和清除速率，因此测定血浆蛋白结合率对于理解化合物的活性以及组织分布有很重要的参考意义。 目前常用于PPB测定的方法主要包括平衡透析法（equilibrium dialysis），超滤法（utrafiltration method），超速离心法（ultracentrifugation method），凝胶过滤法（gel filtration）等。 其中，平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法，也是研究药物血浆蛋白结合率的经典方法。 汇智泰康针对血浆蛋白结合率测定试验研发针对性的平衡透析装置，平衡透析装置包括2n个透析池和透析池之间的透析膜组成，可以同时对多个样品进行透析测定，确定游离化合物比例。透析膜选用高分子膜，孔径可根据客户需求定制。 产品： 血浆蛋白结合平衡透析装置 血浆蛋白结合试剂盒 血浆蛋白结合试剂盒-猴血浆 血浆蛋白结合试剂盒-比格犬血浆 血浆蛋白结合试剂盒-大鼠血浆 血浆蛋白结合试剂盒-小鼠血浆 平衡透析膜（12kd-14kd，25kd，50kd） 空白血浆（大鼠，小鼠，比格犬，猴） ADME相关产品 Ⅰ相代谢稳定性试剂盒 Ⅱ相代谢稳定性试剂盒 CYP450 酶代谢表型研究试剂盒（化学抑制法/7种抑制剂） CYP450 酶代谢表型研究试剂盒（重组酶法/7种酶） CYP450 酶代谢表型研究试剂盒（重组酶法/单酶） 酶抑制（IC50）研究试剂盒（7种特异性底物） 酶抑制（IC50）研究试剂盒（单个酶） NADPH再生系统 UGT孵育系统 0.1M PBS 肝微粒体（人，猴，犬，大鼠，小鼠） 肝S9（人，猴，犬，大鼠，小鼠） 肝原代细胞（人，猴，犬，大鼠，小鼠） CYP450（CYP1A2，CYP2A6，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4） UGT酶 探针底物，代谢产物，抑制剂（CYP1A2，CYP2A6，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4） 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

肝组织匀浆——空白生物基质 2022-01-12

在生物样品分析过程中，如采用质谱方法进行试验时，需要考察基质效应。在考察基质效应的过程中，需使用至少6批来自不同供体的空白基质。我们可根据客户需求提供混合或单供体的空白基质。  IPHASE/汇智和源可提供不同动物种属空白组织匀浆，包括肝组织匀浆，脑组织匀浆，肾组织匀浆等，另外还可提供特殊动物种属空白基质定制采集服务。 肝组织匀浆，脑组织匀浆，肾组织匀浆，粪便组织匀浆等 产品： 大鼠肝组织匀浆   SD大鼠，Wistar大鼠 小鼠肝组织匀浆   ICR/CD-1小鼠，C57小鼠，BALB/c小鼠 比格犬肝组织匀浆 猴肝组织匀浆     食蟹猴，恒河猴 其他种属肝组织匀浆 空白基质： 全血，血清，血浆，脑脊液，乳汁，尿液，胆汁，胃液，粪便，肝组织，脑组织，肾组织，肺组织，卵巢组织，角膜组织，房水，玻璃体液，组织匀浆液等。 动物种属：  食蟹猴，恒河猴，比格犬，SD大鼠，Wistar大鼠，Wistar Han大鼠，ICR/CD-1小鼠，C57小鼠，BALB/c小鼠，金黄地鼠，豚鼠，小型猪，兔，猫，牛，羊等。  购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

肝微粒体产品——ADME 2022-01-12

肝微粒体酶是肝细胞内质网的一部分，可催化数百种药物的氧化过程，具有完整的I相代谢酶（如细胞色素P450 、黄素单加氧酶、单胺氧化酶等），II相代谢酶（如葡萄糖醛酸转移酶，硫酸基转移酶）、酯酶等，能体现人体内药物代谢的情况，是FDA指定的预测人体内代谢及抑制试验的研究工具。 IPHASE/汇智和源可提供不同种属肝微粒体，包括大鼠肝微粒体，小鼠肝微粒体，人肝微粒体，猴肝微粒体，比格犬肝微粒体，兔肝微粒体，猪肝微粒体等，也可以提供鱼肝微粒体，猫肝微粒体，鸡肝微粒体，鸭肝微粒体，牛肝微粒体，羊肝微粒体等特殊种属肝微粒体的定制。此外，其他组织微粒体，包括肠微粒体，肺微粒体，肾微粒体，皮肤微粒体亦可定制。 人肝微粒体  IPHASE Human Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 人 男性 人肝微粒体  IPHASE Human Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 人 女性 食蟹猴肝微粒体   IPHASE Monkey(Cynomolgus) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 猴 雄性 食蟹猴肝微粒体  IPHASE Monkey(Cynomolgus) Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 猴 雌性 恒河猴肝微粒体   IPHASE Monkey(Rhesus) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 猴 雄性 恒河猴肝微粒体   IPHASE Monkey(Rhesus) Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 猴 雌性 比格犬肝微粒体   IPHASE Dog(Beagle) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 比格犬 雄性 比格犬肝微粒体   IPHASE Dog(Beagle) Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 比格犬 雌性 SD大鼠肝微粒体   IPHASE Rat(Sprague-Dawley) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 大鼠 雄性 SD大鼠肝微粒体   IPHASE Rat(Sprague-Dawley) Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 大鼠 雌性 Wistar Han大鼠肝微粒体 IPHASE Rat(Wistar Han) Liver Microsomes,Male   0.5mL,20mg/mL 大鼠 雄性 Wistar Han大鼠肝微粒体 IPHASE Rat(Wistar Han) Liver Microsomes,Female   0.5mL,20mg/mL 大鼠 雌性 ICR/CD-1小鼠肝微粒体      IPHASE Mouse(ICR/CD-1) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 小鼠 雄性 ICR/CD-1小鼠肝微粒体      IPHASE Mouse(ICR/CD-1) Liver Microsomes,Female   0.5mL,20mg/mL 小鼠 雌性 C57BL/6小鼠肝微粒体       IPHASE Mouse(C57BL/6) Liver Microsomes,Male 0.5mL,20mg/mL 小鼠 雄性 C57BL/6小鼠肝微粒体       IPHASE Mouse(C57BL/6) Liver Microsomes,Female 0.5mL,20mg/mL 小鼠 雌性 体外代谢配套产品： NADPH再生系统（A液B液） 0.1M PBS缓冲液（pH7.4） ADME产品：肝微粒体（肠微粒体等），肝S9（肠S9等），肝胞质液（细胞浆），原代肝细胞，CYP450酶，UGT酶，体外代谢标准品等 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

肝S9产品——ADME 2022-01-11

肝S9是肝匀浆液的去线粒体上清液，包含了大量的CYPs等药物代谢酶，S9也是研究药物代谢和药物相互作用的常用工具之一。肝S9对于研究化合物的代谢和考察潜在的药物—药物相互作用是非常有用的研究工具。 IPHASE/汇智和源可以提供不同种属肝S9（肝微粒体酶S9），包括大鼠肝S9，人肝S9，小鼠肝S9，食蟹猴肝S9，比格犬肝S9等，另外，可以提供特定种属的肝S9定制服务。 产品： 大鼠肝S9    0.5mL 20mg/mL   SD大鼠 小鼠肝S9    0.5mL 20mg/mL   ICR/CD-1小鼠，C57小鼠，BALB/c小鼠 比格犬肝S9    0.5mL 20mg/mL 猴肝S9    0.5mL 20mg/mL   食蟹猴 恒河猴 人肝S9    0.5mL 20mg/mL 体外代谢配套产品： NADPH再生系统（A液B液） 0.1M PBS缓冲液（pH7.4） ADME产品：肝微粒体（肠微粒体等），肝S9（肠S9等），肝胞质液（细胞浆），原代肝细胞，CYP450酶，UGT酶，体外代谢标准品等 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买