空白血清——空白生物基质 2022-05-27

在生物样品分析过程中，如采用质谱方法进行试验时，需要考察基质效应。在考察基质效应的过程中，需使用至少6批来自不同供体的空白基质。我们可根据客户需求提供混合或单供体的空白基质。  IPHASE/汇智和源可提供不同动物种属空白血清，包括大鼠血清，小鼠血清，比格犬血清，猴血清，兔血清，猪血清等，另外还可提供特殊动物种属空白基质定制采集服务。 产品： 空白大鼠全血    Rat Whole Blood  SD大鼠，Wistar大鼠 空白小鼠全血    Mouse Whole Blood  ICR/CD-1小鼠，C57小鼠，BALB/c小鼠 空白比格犬全血  Beagle Dog Whole Blood 空白猴全血      Monkey Whole Blood  食蟹猴 恒河猴 空白兔全血      Rabbit Whole Blood  新西兰兔 空白猪全血      Minipig Whole Blood 巴马小型猪 其他全血定制 空白基质： 全血，血清，血浆，脑脊液，乳汁，尿液，胆汁，胃液，粪便，肝组织，脑组织，肾组织，肺组织，卵巢组织，角膜组织，房水，玻璃体液，组织匀浆液等。 动物种属：  食蟹猴，恒河猴，比格犬，SD大鼠，Wistar大鼠，Wistar Han大鼠，ICR/CD-1小鼠，C57小鼠，BALB/c小鼠，金黄地鼠，豚鼠，小型猪，兔，猫，牛，羊等。  购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

磁性细胞分选技术 2022-05-27

磁性细胞分选（MACS）是一种20世纪70年代发展起来的相对高效简便的细胞分选方法，所需设备和操作较为简单，对操作人员的技术要求也不高，只是让细胞处于一个低磁场中，基本可以忽略对细胞的影响，分离得到的细胞具有较高的复苏率及细胞活性，对于下游应用影响较小，在保持细胞活性方面优于流式分选，是细胞分选的首选方法，具有潜在的应用前景。 1    磁性细胞分选原理 磁性细胞分选是基于免疫学中抗原抗体之间特异性结合的原理进行的。以磁性微粒作为载体，对其进行抗体或亲和配体包被，形成免疫磁性复合微粒，当其与混合细胞孵育后，磁性微粒表面抗体会与细胞表面的抗原决定簇发生抗原抗体的特异性反应，使得细胞被磁性复合微粒标记。在外加磁场的作用下，抗体与磁珠相连的细胞会因磁珠的磁性而滞留在磁场中，而不表达此抗原的细胞因不能与磁珠表面的特异性抗体结合而没有磁性，不能够在磁场中滞留，从而使目的细胞与非目的细胞分开，得到较高纯度的目的细胞。 图1 免疫磁性细胞分选原理示意图 2    磁性细胞分选分类 根据分选过程中所标记细胞类型的不同将免疫磁性细胞分选系统分为阳性分选、阴性分选和复合分选三种。 阳性分选，即将目的细胞亚群直接从细胞悬液中分离出来。通过磁珠包被目的细胞的特异性抗体与混合细胞悬液孵育，在抗原抗体发生特异性结合后，通过磁分离方式，将目的细胞分离出来。 阴性分选，即从多细胞悬液中分离去除非目的细胞而得到目的细胞的一种方法。此方法的优点在于整个分选过程中目的细胞都未与磁珠结合。由于抗原抗体的结合可能会引起细胞膜表面的信号传递，因此，此法具有较大的优势。但同时此方法也有不足之处，当靶细胞的细胞数所占细胞比例较小时，分选过程中存在的非特异性吸附会直接导致目的细胞的损失，此外，非目的细胞未被充分去除等，都会使得细胞的分选效率和分选纯度较低。

肠微粒体在药物代谢中的应用 2022-05-23

1    肠代谢与肠微粒体 药物被机体吸收后，在体内各种酶以及体液环境作用下发生化学结构的改变的过程，称为药物代谢（Drug metabolism），又称生物转化（Biotransformation）。药物代谢主要在肝中进行，也发生在肠、肾、肺、血液和皮肤等器官，尤其是药物的肠代谢越来越受到人们的关注。口服药物主要经小肠和大肠吸收进入肠毛细血管床，它是药物进入体内的一条重要途径，但研究发现许多药物通过肠道时即被代谢，这种肠道的首过效应往往造成进入体循环的实际药量减少，从而导致药物的生物利用度降低。 肠道中药物代谢酶主要分布于上皮细胞，中绒毛尖端活性最强，然后朝着腺窝方向逐渐降低，十二指肠和空肠的代谢活性高于回肠和结肠。肠微粒体是肠黏膜在匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的亚细胞结构，包含I相代谢酶和II相代谢酶，故肠微粒体在体外药物的代谢研究中得到了广泛应用。 2    IPHASE肠微粒体产品 胃肠壁是口服药物首过代谢的重要部位，通常与CYP450酶和UGT酶有关。然而，肠道中酯酶活性的贡献在药物代谢中也可能非常显著。因此，如需研究CYP450酶和UGT酶的代谢，则需排除酯酶代谢对试验结果的影响。IPHASE/汇智和源采用肠道洗脱和蛋白酶抑制剂相结合的方法，经过不断的摸索和优化，在肠微粒体生产过程中尽可能的抑制了酯酶的活性，而保护了肠道亚细胞组分中大多数的CYP450酶和UGT酶的活性，现已形成猴、犬、大鼠和小鼠四个种属的高酶活、稳定性好的肠微粒体自研产品。 3    IPHASE肠微粒体产品竞品对比 IPHASE/汇智和源使用相同的孵育条件，将自研产品和进口同类产品的肠微粒体主要监测指标进行了比对，如CYP450酶活性、NADPH-cytochrome c reductase活性等，结果发现，进口产品和自研产品酶活均在接受范围以内，且自研产品的酶活可达进口产品的2倍以上，实现了进口产品的替代。 4    IPHASE产品优势 l 酶活高 酶活高于同类进口产品。 l  批量生产 采用批量生产方式，库充充足，可保证同一批次产品的供应。 l  货期短 国内现货，保障客户使用需求。 l 售后服务机制健全 有专业技术人员为客户提供全方位服务。 l 定制服务 可根据客户需求提供定制产品。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品。 5    其他相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

小鼠外周血单个核细胞的应用 2022-05-20

小鼠外周血单个核细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。 单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。单核细胞在血液中停留2-3天后迁移到周围组织中，细胞体积继续增大，直径可达50-80μm，细胞内所含的溶酶体颗粒和线粒体的数目也增多，成为成熟的细胞。 小鼠外周血单个核细胞 固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞，它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防卫机制，还产生一些能促进内皮细胞和平滑肌细胞生长的因子。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。 应用[4][5] 用于苯短期重复染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏免疫功能的影响研究 通过构建苯染毒小鼠模型,从免疫器官、免疫细胞和免疫分子等多个水平研究苯染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏的免疫毒性,为进一步探究苯的免疫毒性效应及其作用机制提供实验研究依据。 方法:1.将40只6-8周龄的雄性无特定病原体级BALB/c小鼠随机分为4组:对照组（玉米油）、低剂量组（50mg/kg）、中剂量组（150mg/kg）和高剂量组（500mg/kg）,每组10只。每天经口灌胃1次,每周5天,连续4周。染毒期间每周观察记录小鼠体重变化,末次染毒24小时后进行各项指标的检测。 2. 采取小鼠的外周血进行血常规分析;使用酶联免疫吸附试验测定血浆中免疫球蛋白G、白介素-2和白介素-6的含量;使用Mito SOX荧光染料结合流式细胞术测定小鼠外周血单个核细胞线粒体ROS含量,使用ATP测定试剂盒和BCA蛋白测定试剂盒测定小鼠外周血单个核细胞ATP的含量;使用硫代巴比妥酸法测定丙二醛的含量、二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽过氧化物酶的活力、羟胺法测定总超氧化物歧化酶的活力。 3. 无菌解剖小鼠,摘取脾脏并计算脾脏系数,并对小鼠脾脏进行病理学检查;使用TUNEL检测试剂盒检测脾脏细胞的凋亡情况;使用Cell Counting Kit-8试剂盒测定小鼠脾脏中T、B淋巴细胞增殖能力。 4.应用同位素标记相对和绝对定量技术分析比较高剂量组和对照组中小鼠的脾脏蛋白质表达差异,利用Gene Ontology和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes数据库对差异蛋白进行生物信息学分析,找出关键差异表达蛋白并应用Wes全自动蛋白定量分析系统和实时荧光定量PCR技术验证差异蛋白及其相应的mRNA表达水平。#细胞# 参考文献 [1]Carcinogenicity of benzene[J].Dana Loomis,Kathryn Z Guyton,Yann Grosse,Fatiha El Ghissassi,Véronique Bouvard,Lamia Benbrahim-Tallaa,Neela Guha,Nadia Vilahur,Heidi Mattock,Kurt Straif.The Lancet Oncology.2017(12) [2]Regulation of Signal Transduction by Reactive Oxygen Species in the Cardiovascular System[J].David I.Brown,Kathy K.Griendling.Circulation Research.2015(3) [3]Benzanthrone induced immunotoxicity via oxidative stress and inflammatory mediators in Balb/c mice[J].Prachi Tewari,Ruchi Roy,Sakshi Mishra,Payal Mandal,Ashish Yadav,Bhushan P.Chaudhari,Rajnish K.Chaturvedi,Premendra D.Dwivedi,Anurag Tripathi,Mukul Das.Immunobiology.2014 [4]Diamond–Blackfan anemia with mandibulofacial dystostosis is heterogeneous,including the novel DBA genes TSR2 and RPS28[J].Karen W.Gripp,Cynthia Curry,Ann Haskins Olney,Claudio Sandoval,Jamie Fisher,Jessica XiaoLing Chong,Lisa Pilchman,Rebecca Sahraoui,Deborah L.Stabley,Katia SolChurch.Am.J.Med.Genet..2014(9) [5]胡辉.苯短期重复染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏免疫功能的影响[D].军事科学院,2019. 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

外周血单个核细胞（PBMC） 2022-05-19

1    PBMC简介 外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC）是外周血中具有单个核的细胞，是白细胞（WBC）的一个子集，白细胞是机体免疫系统对抗疾病的组成部分。PBMC主要由淋巴细胞（T细胞、B细胞和NK细胞）和单核细胞组成，通过密度梯度离心从外周全血中分离。PBMC被广泛应用于药物发现/开发、分析验证/开发和其他免疫学相关研究中。 2    IPHASE产品 IPHASE/汇智和源顺应药物开发和免疫学研究等的需求，不断优化PBMC的提取工艺，形成了各种属高质量的PBMC产品，如人PBMC、猴PBMC、犬PBMC、大鼠PBMC、小鼠PBMC、猫PBMC、小型猪PBMC、兔PBMC等。根据客户的使用要求和习惯，我们可提供新鲜分离和液氮冻存两种形式的PBMC产品，客户可根据实际需求和产品自身特性选择并订购满足要求的产品。新鲜分离的PBMC可很大程度的保留PBMC中稀有细胞的占比，但货期相对较长，试验时间需根据提取时间调整；液氮冻存的PBMC复苏存活率可达90%以上，基本可满足大部分客户的需求，随用随取，可任意安排试验时间，但冻存难免会对细胞造成一定的损伤，如需研究稀有细胞难免会对试验结果造成一定干扰。 3    IPHASE产品特点 l  来源清晰 IPHASE/汇智和源生产PBMC所用血液均由正规生产商采集，进口的人PBMC产品均有伦理和知情，免除了后顾之忧。 l  产品安全   IPHASE/汇智和源PBMC生产所用动物均经过传染源检测，使用更安全、更放心。 l  纯度高 IPHASE/汇智和源的PBMC产品均根据种属特异性使用专用分离液进行提取，产品纯度高。 l  活性好 IPHASE/汇智和源的PBMC产品复苏活性较好，可达90%以上。 除此之外，IPHASE/汇智和源可根据客户特殊需求，提供不同种属和特殊种属动物PBMC产品的定制服务和人PBMC产品的进口服务，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 4    相关产品 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

动员外周血单个核细胞 2022-05-16

1    动员外周血单个核细胞简介 正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右，经有效动员后，骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中，使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血，其各亚型细胞的数量、细胞免疫表型、分泌细胞因子能力和增殖能力等可能会与未动员外周血有一定差异。 2    IPHASE动员外周血单个核细胞 IPHASE/汇智和源动员外周血单个核细胞是采集经重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后的健康供者的外周血，采用密度梯度离心的方法提取其单个核细胞。本产品以液氮冻存形式提供，复苏存活率可达90%以上，随取随用，真正满足了客户任意安排试验的需求。 3    IPHASE产品特点 l  来源清晰 IPHASE/汇智和源动员外周血相关产品均从国外进口而来，有伦理和知情，免除了后顾之忧。 l  产品安全   IPHASE/汇智和源产品的血液供者均经过传染源检测，使用更安全、更放心。 l  纯度高 IPHASE/汇智和源的动员外周血相关产品均使用专用试剂或试剂盒进行提取，产品纯度高。 l  活性好 IPHASE/汇智和源的动员外周血相关产品复苏活性较好，可达90%以上。 除此之外，IPHASE/汇智和源可根据客户特殊需求，提供不同种属和特殊种属动物PBMC产品的定制服务和人PBMC产品的进口服务，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 4    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

骨髓单个核细胞分离方法及注意事项 2022-04-27

骨髓单个核细胞（Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMNCs）是一群混合细胞，其中绝大多数是早幼粒细胞、早幼红细胞、成熟B细胞、T细胞和单核细胞等，还含有少量的干细胞，包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞等，它们密度相近，因此可通过密度梯度离心法从骨髓液中分离出来。 1    原理 单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 2    方法 1）  无菌条件下抽取骨髓于含抗凝剂的采血管内，将骨髓与生理盐水或PBS溶液按等比例混匀，备用。 2）  按照稀释骨髓：细胞分离液比例为3:2的比例，缓慢将稀释骨髓液加入到细胞分离液上层，需保持液面分界清晰。 3）  800g，室温，离心 20min-30min（注：设置较慢的加速度和减速度，如果有十档，设为第三档）。 4）  小心吸取骨髓单个核细胞层（即白膜层）并转移至15mL离心管中。离心结束后，管内液面从上至下依次为无细胞骨髓液层、骨髓单个核细胞层、分离液层和红细胞层（见图1）。 图1 稀释骨髓液离心前后的分层状态图 5）  向离心管中加入10mL 的生理盐水或PBS重悬细胞，250g，室温离心 10min ，弃上清。重复该步骤 1~2 次，即可用于后续试验。 3    注意事项 1）  不同种属动物单个核细胞的比重有一定差异，请选择合适的分离液进行骨髓单个核细胞的分离。 2）  骨髓液新鲜程度是影响分离效果的关键因素，请尽量使用采集后24小时内的骨髓液进行单个核细胞分离。 3）  为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 4）  为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4    脐带血单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对不同种属动物骨髓单个核细胞分离的特点，开发了对应的单个核细胞分离试剂盒，包括人，猴，犬，大鼠，小鼠，兔，猪等。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态；同时，该试剂盒操作简单便捷，可大大缩短细胞分离时间，分离所得细胞纯度高、状态好、得率高。 5    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

动员外周血单个核细胞分离方法和注意事项 2022-04-12

正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右，经有效动员后，骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中，使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血。重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）是外周血动员最常用的动员剂，它可选择性的作用于粒系造血祖细胞，促进其增殖、分化，并可增加外周血中性粒细胞的数目和功能。动员外周血单个核细胞是采集经动员后的健康供者的外周血，采用密度梯度离心的方法提取其单个核细胞，其各亚型细胞的数量、细胞免疫表型、分泌细胞因子能力和增殖能力等可能会与未动员外周血有一定差异。 1    原理 单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 2    方法 1）  取新鲜抗凝动员外周血，按照1：1比例加入1×稀释洗涤液，将血液进行稀释（以降低血液粘稠度），轻柔混匀，备用。 2）  向无菌离心管内加入适量的单个核细胞分离液，将稀释后的血样平铺到分离液液面上方（分离液：稀释动员外周血=1：2），保持两液面界面清晰。 3）  800g，室温，离心 20min-30min（注：设置较慢的加速度和减速度，如果有十档，设为第三档）。 4）  离心结束后，吸弃血浆层，小心吸取PBMC层（即白膜层）并转移至15mL离心管中。离心结束后，管内液面从上至下依次为稀释血浆层、PBMC层、分离液层和红细胞层（见图1）。 图1 稀释动员外周血离心前后的分层状态图 5）  向离心管中加入10mL 重悬细胞，250g，室温离心 10min ，弃上清。重复该步骤 1~2 次，即可用于后续试验。 3    注意事项 1）  血液新鲜程度是影响分离效果的关键因素，请尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离。 2）  为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 3）  为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4    动员外周血单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对动员外周血单个核细胞分离的特点，开发了对应的单个核细胞分离试剂盒。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态；同时，该试剂盒操作简单便捷，可大大缩短细胞分离时间，分离所得细胞纯度高、状态好、得率高。 5    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

脐带血单个核细胞分离方法和注意事项 2022-03-23

脐带血是指胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐带血单个核细胞（Cord Blood Mononuclear Cell，CBMC) 分离自正常人胎盘脐带组织，是脐带血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞等，是机体防御系统的一个重要组成部分。 1    原理 单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 2    方法 1）  取新鲜抗凝脐带血，按照1：1比例加入RPMI 1640培养基，将血液进行稀释（以降低血液粘稠度），轻柔混匀，备用。 2）  向无菌离心管内加入适量的单个核细胞分离液，将稀释后的脐带血平铺到分离液液面上方（分离液：稀释脐带血=1：2），保持两液面界面清晰。 3）  800g，室温，离心 20min-30min（注：设置较慢的加速度和减速度，如果有十档，设为第三档）。 4）  离心结束后，吸弃血浆层，小心吸取CBMC层（即白膜层）并转移至15mL离心管中。离心结束后，管内液面从上至下依次为稀释血浆层、CBMC层、分离液层和红细胞层（见图1）。 图1 稀释脐带血离心前后的分层状态图 5）  向离心管中加入10mL 的RPMI 1640培养基洗涤细胞，250g，室温离心 10min ，弃上清。重复该步骤 1~2 次，即可用于后续试验。 3    注意事项 1）  血液新鲜程度是影响分离效果的关键因素，请尽量使用采集后24h内的血液进行CBMC分离。 2）  为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 3）  为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4    脐带血单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对人脐带血单个核细胞分离的特点，开发了人脐带血单个核细胞分离试剂盒。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态；同时，该试剂盒操作简单便捷，可大大缩短细胞分离时间，分离所得细胞纯度高、状态好、得率高。 5    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购买方式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

脾脏单个核细胞分离方法及注意事项 2022-03-03

脾脏（spleen）位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，是体内最大的淋巴器官，也是血流通路中的过滤器官。脾脏内定居着大量的淋巴细胞和其它免疫细胞，是机体发生特异性免疫应答的场所。 1    原理 单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 2    方法 1）无菌条件下取出脾脏，在培养皿中加入适量的分离液，将脾脏放入细胞筛中，置于分离液中进行研磨（具体方法见示意图1）。 图1 脾脏研磨方法示意图 2）将悬有脾脏细胞的分离液立即转移入无菌离心管中，在上层覆盖适量的RPMI 1640培养基，且需保持液面分界清晰。 3） 800g，室温，离心 20min-30min（注：设置较慢的加速度和减速度，如果有十档，设为第三档）。 4） 离心结束后，吸弃RPMI 1640培养基，小心吸取脾脏单个核细胞层（即白膜层）并转移至15mL离心管中。离心结束后，管内液面从上至下依次为RPMI 1640培养基层、脾脏单个核细胞层、分离液层和红细胞层（见图2）。 图2 细胞悬液离心前后的分层状态图 5）向离心管中加入10mL 的RPMI 1640培养基洗涤细胞，250g，室温离心 10min ，弃上清。重复该步骤 1~2 次，即可用于后续试验。 3    注意事项 1）不同种属动物单个核细胞的比重有一定差异，请选择合适的分离液进行脾脏单个核细胞的分离。 2）分离液易挥发，在脾脏研磨过程中请尽量缩短时间，将研磨时间控制在5min以内。 3）研磨过程中请尽量控制研磨力度，保证细胞筛悬空，避免在培养皿底部直接研磨而造成细胞大量死亡。 4）若研磨后细胞悬液呈暗红色，需将其进行适量稀释后再进行后续操作。 5）为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 6）为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4    脾脏单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对不同种属动物脾脏单个核细胞分离的特点，开发了对应的单个核细胞分离试剂盒，包括人，猴，犬，大鼠，小鼠，兔，猪等。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态；同时，该试剂盒操作简单便捷，可大大缩短细胞分离时间，分离所得细胞纯度高、状态好、得率高。 5    相关产品 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式： 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买