肝微粒体、肝S9、肝胞质液与体外药物代谢 2023-03-13

药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。由于肝脏是药物代谢的主要场所，体外代谢模型多以肝脏为基础。 1    什么是药物代谢？ 临床前研究是新药研发中必不可少的环节，而药物代谢动力学是临床前药理评价的重要组成部分。药物被机体吸收后，在体内各种酶以及体液环境作用下发生化学结构改变的过程成为药物代谢（Drug Metabolism），又称生物转化（Biotransformation）。药物代谢主要在肝中进行，也发生在肠、肾、肺、血液和皮肤等器官。药物在体内的生物转化，分为Ⅰ相代谢反应和Ⅱ相代谢反应。药物分子上引入新的基团或除去原有小基团的官能团反应称为Ⅰ相代谢，包括氧化、还原和水解等反应。药物或Ⅰ相代谢产物与体内某些内源性小分子结合的反应为Ⅱ相代谢，亦称为结合反应，如葡萄糖醛酸结合、磷酸化、甲基化、乙酰化、谷胱甘肽结合等反应。多数亲脂性的药物吸收后，经Ⅰ相代谢可变为极性和水溶性较高的代谢产物，有利于Ⅱ相代谢的进行而增加极性。Ⅱ相代谢是真正的“解毒”途径，其代谢产物通常具有更好的水溶性，更易经尿液和胆汁排出体外。 2    肝亚细胞模型在药物体外研究中的应用 药物生物转化中的一个关键且复杂的问题是如何将体外研究的结果进行外推，建立体内-体外的相关性，从而预测药物在人体内的代谢行为，进而预测药物的有效性和安全性。要相对准确的进行此类预测工作，合理的体外研究模型的选择非常关键。肝亚细胞模型如肝微粒体（Liver Microsomes）、肝S9（Liver S9 Fractions）、肝胞质液（Liver Cytosol）因其应用操作简单、价格合理、储存方便，在药物代谢的初期筛选方面得到了广泛应用。 表1 不同肝亚细胞模型的优缺点和应用 2.1 肝微粒体（Liver Microsomes） 肝微粒体是指肝组织在匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构，包含了CYP450酶和一些Ⅱ相酶，如UGTs、ST等。肝微粒体用于CYP450酶研究时，只需要加入NADPH或NADPH的再生系统即可启动反应。对于UGT酶活性的研究，则需加入尿苷二磷酸葡萄糖（UDPGA）和丙甲菌素启动反应。 由于肝微粒体是Ⅰ相代谢酶的主要来源，故肝微粒体在体外药物代谢研究中被广泛使用。肝微粒体不但可以为系统的药物代谢提供定性的信息，而且可以在药物研发过程中用于大量化合物代谢稳定性的筛选及优化，同时可以用于评价潜在的药物药物相互作用。 2.2 肝S9（Liver S9 Fraction） 肝脏S9是肝组织去除匀浆沉淀物后的含有代谢所需成分、具有完整代谢功能的混悬溶液。相对于微粒体和胞质液，S9包含了完整的I相和Ⅱ相代谢酶的活性，能更完整地用于药物的代谢轮廓研究。 有的药物经过I相代谢后又经过Ⅱ相代谢，形成一些特定的代谢产物，这样的代谢产物往往在微粒体或胞质液的体系中不容易被发现。因S9具有完整的酶系，可以用于代谢产物系统的定性研究。由于该系统中代谢酶活性相对于微粒体和胞质液低，代谢产物的形成量也很少，往往不容易被检测到。同时，因该体系中含有大量的脂类物质和其它蛋白质，容易降低药物的游离程度，从而使实验结果出现偏差。 2.3 肝胞质液（Cytosol） 肝胞质液包含了可溶性的Ⅱ相代谢酶，如NAT、GST、ST、TPMT等，在很多化疗药物的激活与解毒过程中发挥重要作用。与I相酶一样，Ⅱ相酶发生代谢反应同样也需要外源性的辅酶来催化。例如，NAT需要乙酰辅酶A(acetyl CoA)、二硫苏糖醇（DTT）和乙酰辅酶A的再生系统来催化；ST需要腺苷-3’-磷酸-5’-磷酰硫酸（PAPS）来催化；GST需要谷胱甘肽来催化。由于该体系中只有Ⅱ相代谢酶存在，且相对于肝S9来讲酶活还很高，因此可通过加入不同的辅酶来单独研究某个亚型酶的代谢。 3    IPHASE产品及优势 IPHASE凭借先进的设备、专业的技术人员和多年研发的经验，开发出了不同种属动物的肝微粒体、肝S9、肝胞质液等产品，助力于药物的体外代谢研究。 l  酶活高 酶活可对标或高于同类进口产品 l  批量生产 采用批量生产方式，库充充足，可保证同一批次产品的供应 l  货期短 国内现货，保障客户使用需求 l  售后服务机制健全 有专业技术人员提供全方位服务 l  可定制 可提供特定物种、特定模型和特定年龄等非常规样品的定制服务 图2 某药物在不同种属动物肝微粒体中的I相代谢稳定性 图3某药物在人肝微粒中的代谢抑制率 表2 IPHASE肝微粒体（Liver Microsomes） 表3 IPHASE肝S9（Liver S9 Fractions） 表4 IPHASE肝胞质液（Liver Cytosol） IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

CD14+单核细胞：Macrophage和DC的前体细胞 2023-03-02

单核细胞（monocytes）是体积最大的白细胞，直径14~20μm，呈圆球形，约占血液中单个核细胞数的10~30%。单核细胞是重要的天然免疫效应细胞，在感染过程中能快速从外周血迁移到组织中，参与病原体的识别和清除。同时，单核细胞还是巨噬细胞和树突状细胞的前体细胞。单核细胞分化的巨噬细胞对于天然免疫、细胞因子的分泌、细胞内多种病原体的清除以及建立有效的免疫应答等都具有重要作用，而其分化的树突状细胞是功能强大的抗原呈递细胞，能够启动并调节适应性免疫反应，在抗感染及抗肿瘤免疫研究中起关键作用。 图1 单核细胞分化为Macrophage和DC流程图 巨噬细胞（Macrophage），是机体重要的固有免疫细胞，负担着吞噬和杀灭胞内寄生虫、细菌、肿瘤细胞、以及自身衰老和异常的细胞，在机体的免疫防御、免疫自稳和免疫监视中发挥重要作用。血液中的单核细胞转移至身体的各个组织和器官后会继续分化成巨噬细胞，故身体的各个部位其实都存在着巨噬细胞，但因所处的组织位置和对应功能表型不同，名称也会有所差异，如小胶质细胞、破骨细胞、肺巨噬细胞、脾脏组织细胞和间质结缔组织、肝间质结缔组织和kupffer细胞等。由于现实原因，我们很难获得组织中的巨噬细胞，因而基本都选择从单核细胞在体外进行分化得到。 树突状细胞（Dendritic Cell，DC）作为免疫应答中最重要的专职性抗原递呈细胞（APC），在机体内具有摄取、加工、递呈外来抗原，并将抗原信号传递给T细胞的功能。同时DC表达一系列激活T细胞的分子（如CD80和CD86等），使T细胞获得激发的协同刺激信号，并产生诸如IL-12等可进一步加强T细胞活化和功能的细胞因子。但是，由于DC 在血细胞中所占的比例极低（仅占单个核细胞总数的0.1%~1%），难以分离和纯化，所以采用直接分离的方法获得DC 的数量难以满足免疫学研究的需要。业已表明，一些细胞因子（如GM-CSF、IL-4、TNF-α等），可促进DC 的前体细胞（如骨髓中CD34+细胞和外周血中CD14+单个核细胞等）分化为DC，使DC 成熟并具有生物学功能。外周血细胞来源方便，因此通过诱导外周血中的单核细胞分化成为DC 的方法，以其独特的优点而成为应用最广泛的方法。 IPHASE产品 IPHASE/汇智和源凭借完备的研发平台和多年技术经验的积累，特推出了人CD14+单核细胞免疫磁性阳性分选和阴性分选试剂盒、CD14+单核细胞等产品，助力免疫研究。 l  便捷性 操作较为简单，对人员要求不高 l  高效性 仅需30min即可分选得到目的细胞 l  高纯度 目的细胞纯度可达95%以上 l  高活性 目的细胞活性可达95%以 l  无需分离柱 仪器设备要求低，只需磁力架即可达到快速有效的细胞分选 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

新品推荐 | SOS/umu遗传毒性检测试剂盒 2023-02-27

1    umu试验简介 umu试验，又称SOS/umu试验，是1985年由Oda等根据损伤时诱导SOS反应而表达umuC基因这一基本原理建立并发展起来的检测环境诱变质的短期筛选试验 。 1.1  umu定义 umu是UV mutable的缩写形式, 原始含义是经紫外线照射引起的突变。umu基因来源于大肠杆菌, 主要的2种存在形式是umuC和umuD，均属于DNA聚合酶V。umuC基因的大小为45KDa,其跨越无碱基位点的合成能力比聚合酶III高100~150倍；umuD基因的大小为15KDa，它能促进DNA 损伤的修复。  umuC和umuD是SOS调节子的重要成员, 诱导后才能表达RecA。凭借它的蛋白酶活性, 把umuD在CYS24和GLY25之间切开, 得到12KDa的umuD′才是活性形式，umuD在CYS24和GLY25之间切开, 得到12KDa的umuD′才是活性形式，umuD 非但无益, 反而有损SOS诱导, 在SOS诱变中起作用的是umuD′2C 三元化合物。 1.2  SOS反应 菌体的DNA受放射线或致突变物质作用受到损伤后合成停止, 受损DNA诱导产生一系列物质, 同时启动DNA 修复所需的酶提高其活力, 使受损的DNA修复, 重新恢复细胞分裂, 这一过程称为SOS反应。此时, 细胞表现为 DNA 修复功能增强, 细胞生长正常, 但分裂受抑制, 基因突变增加, 呼吸受阻等。细胞受理化因素损伤产生的寡核苷酸、单链或缺口双链 DNA 等成为诱导信号, 使无活性的RecA蛋白被激活 , 激活的RecA蛋白可与单链DNA（ssDNA)结合形成 RecA/SDNA 核蛋白体, 后者介导 LexA裂解, LexA蛋白水平下降可诱导 SOS调节子大量转录 LexA 基因, 同时也激活原被LexA蛋白阻止的SOS相关基因 umuC和umuD基因。 图1 SOS的调节原理 图片来源：郑松涛的硕士毕业论文《土壤样品毒性评价研究一样品前处理及毒性测试》 1.3  umu试验 SOS/umu试验，即经典的umu试验，是基于DNA损伤物诱导SOS反应而表达umuC基因的能力, 在鼠伤寒沙门菌（Salmonella. Typhimurium TA1535）中导入携带umuC′LacZ嵌合体的质粒 Psk1002,该质粒携带umu操纵子，umuD基因和umuC′LacZ融合基因的启动子及四环素和氯霉素耐药基因，允许通过药物选择转化株，新构建的细菌为Styphimurium TA1535/Psk1002。当细菌受到诱变物作用引起SOS反应时, 激活umuC′LacZ融合基因, 表达出有β半乳糖苷酶活性的融合蛋白。根据此酶分解邻硝基苯 β-D-半乳糖苷（ONPG）的产物颜色深浅，通过定量检测被诱导酶的数量，判断 DNA 是否受损伤及受损伤的程度。 图2 umu试验原理 图片来源：郑松涛的硕士毕业论文《土壤样品毒性评价研究一样品前处理及毒性测试》 2    umu试验在遗传毒性研究中的应用 目前认为，人类90％以上的肿瘤与环境有关，近年来环境污染虽有所控制但其残留的影响仍不容忽视，适当的监测系统对评估环境危害非常必要。由于umu基因与DNA损伤密切相关，SOS/umu试验能更准确地反映潜在致突变物质的遗传毒性，且因其与Ames 试验的测试结果有较好的一致性，具有单一菌种、试验周期短、能够定量比较、对实验环境要求不严格等优点，已越来越受到各个领域研究的青睐，现已广泛应用于水、土、空气样本的遗传毒性监测与质量的评估。 20世纪末，日本将SOS/umu试验作为供水和废水检测的官方推荐方法；德国标准化组织发布DIN 38415标准，规定用SOS/umu试验测定水的遗传毒性；国际标准化组织2000 年发布标准ISO13829:2000（E），制定了SOS/umu试验用于水和废水遗传毒性的方法标准；此外，马来西亚在2008年颁布标准MS ISO 13829:2008，将SOS/umu 试验作为标准方法用于废水的遗传毒性测试。土壤是一个多环芳烃（PAHs）库, 日本的 Yoshimitsu Oda 等人用高处理量的umu微平板实验系统对含硝基的多环芳烃进行了研究, 结果表明umu-微平板实验系统是一种快速检测微量样品的有效方法。我国张徐军等用SOS/umu实验检测了车站空气中污染颗粒物中的致癌物质的遗传毒性, 结果表明未加入S9活化系统时发现有遗传毒性, 并且遗传毒性有明显的剂量-反应关系, 但在加入S9活化系统后未发现遗传毒性。日本的 Yoshimitsu Oda等人用高处理量的 umu-微平板实验系统测定空气中传播的颗粒物的致突变性, 发现在S9活化系统下, 用含氧-乙酰转移酶( O-AT ) 和硝基还原酶( NR) 的typhimurium NM3009检测效果很好。 3    IPHASE umu遗传毒性检测试剂盒 IPHASE基于遗传毒性检测需求，已Styphimurium TA1535/Psk1002为测试菌株，以96孔板为载体，以4-NQO作为umu试验中样品遗传毒性测定时的阳性对照，由β-半乳糖苷酶诱导活性值得出的4-NQO活性曲线则作为umu试验菌株活性的判断依据，借助酶标仪的检测系统，开发出了umu遗传毒性检测试剂盒，助力于遗传毒性研究。 • 准确性 与Ames试验的测试结果有较好的一致性 • 高通量 可同时进行多个样品的遗传毒性检测 • 高效性 试验周期短，试验当天即可完成样品的遗传毒性的检测 • 低要求 对试验环境的要求较低，无需严格的无菌环境 图3 umu试验结果模式图 4    相关产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为遗传毒性研究提供便捷产品。此外，IPHASE/汇智和源可提供特殊产品的定制服务，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

原代肝细胞：药物研发最强“CP” 2023-02-21

肝脏是药物代谢的重要器官，体外代谢模型多以肝脏为基础。常用的体外模型有肝微粒体、肝S9、肝胞质液、原代肝细胞、肝组织切片、重组人代谢酶等。其中，原代肝细胞因具有较好的体外试验重现性，基本维持了肝脏的代谢功能，特别是较好的保留了与体内一致的酶水平，成为了体外药物试验的“金标准”，广泛应用于药物代谢与毒理学研究中。 1    原代肝细胞的特点 原代肝细胞(Primary hepatocytes)是指从动物肝脏直接分离的肝实质细胞。原代肝细胞作为一种体外模型，具有其它体外模型不可替代的优点：①与体内环境保持一致，酶量和辅助因子水平都是正常的生理浓度，可以在接近生理状态的的情况下研究药物的代谢和毒性；②较好保留和维持了肝细胞的完整形态和肝细胞体外代谢活性，真实反应了体内的代谢情况；③无须担心动物实验的伦理问题，亦可减少动物实验所需要的的成本开支，实现了减少（Reduction）、替代（Replacement）、优化（Refinement）的 3R 伦理原则。 肝细胞被分离后，可进行贴壁培养和悬浮培养。悬浮培养的原代肝细胞在最开始的4h内细胞色素P450酶的活性最为和体内一致，随时间的延长而迅速下降；贴壁培养的原代肝细胞有足够的时间从损伤中恢复过来，具有正常细胞的形态特征。随着3D培养技术的出现，原代肝细胞的应用范围也进一步得到了扩展。 2    原代肝细胞的应用 随着技术水平的不断提高，原代培养的动物和人肝细胞已广泛应用于药物研究：①探讨药物在肝中的代谢途径和药物药代动力学的研究；②预测和解释药物与药物之间的相互作用；③研究药物的细胞毒性等。 2.1  原代肝细胞在药物代谢中的应用 原代肝细胞作为药物代谢研究的经典模型，在探讨药物在肝中的代谢途径和药代动力学的研究中发挥着重要作用。将苗头化合物与悬浮原代肝细胞共孵育，不但可对化合物在肝细胞中的代谢稳定性进行研究，而且还可得到相对多量的高纯度的代谢产物，在研究药物生物转化特征，寻找药物可能的代谢物方面优势显著。尤其是当有证据显示化合物的生物转化途径为二相代谢、水解作用或肝微粒体中非特异性蛋白结合很高、肝微粒体中代谢不明显的时候，原代肝细胞更为不可替代的体外模型。 2.2  原代肝细胞在药物-药物相互作用研究中的作用 在临床应用中患者经常会同时使用多种药物，这些药物可能会产生药物-药物相互作用（Drug-drug interaction，DDI，简称药物相互作用），有可能导致严重不良反应或改变治疗效果。因此，有必要对DDI发生的可能性和严重性及其影响程度进行科学评估。DDI评估通常从体外试验开始，确定可能影响药物处置的因素以阐明潜在的DDI机制，并获得用于进一步研究的动力学参数，其主要内容包括：确定药物的主要消除途径；评估相关代谢酶和转运体对药物处置的贡献；考察药物对代谢酶和转运体的影响。贴壁原代肝细胞即为DDI体外评估的经典模型，尤其是在评估化合物是否为代谢酶的诱导剂方面更是扮演着不可或缺的角色。 2.3  原代肝细胞在毒理学中的作用 药物的毒性研究是药物研究的重要组成部分。药物通过肝脏代谢后，大多数药物的毒性被消除，但同时也有一些无毒或低毒的物质通过生物转化后转变成有毒甚至毒性更大的物质，因此肝脏便必然成为研究药物毒性的重要靶器官。原代肝细胞即为一个较好的筛选模型，尤其是在检测结构相关化合物时，原代肝细胞的角色更为重要。 3    IPHASE原代肝细胞产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的技术能力和技术经验的积累，不断摸索和优化原代肝细胞分离过程，现已形成猴、犬、大鼠、小鼠等原代肝细胞产品。 l  合规性 合规是研究的开始，产品来源清晰，免除了后顾之忧。 l  安全性 生产产品的动物均经过传染源检测，使用安全、放心。 l  纯度高 肝实质细胞的占比可达95%以上。 l  复苏率高 冻存复苏率可达95%以上。 l  活性高 生产工艺成熟，尽可能的保证了酶活性。 l  可定制 可根据客户特殊需求，提供特殊种属、特殊组织细胞的定制服务。 l  高活性   目的细胞活性可达95%以上。 3.1  经代谢验证原代肝细胞 代谢稳定性反映了化合物对生物转化的敏感性，若代谢稳定性低，意味着化合物在体内较容易被代谢，往往预示着不良的药代动力学性质，如口服利用度低、作用时间短；代谢稳定性试验得到的人体外内在清除率Clint可用于进行人体清除率的预测；各种属间代谢速率的一致性信息可为安评动物种属的选择提供一定的数据支持。且还可得到相对多量的高纯度的代谢产物，在研究药物生物转化特征，寻找药物可能的代谢物方面优势显著。尤其是当有证据显示化合物的生物转化途径为二相代谢、水解作用或肝微粒体中非特异性蛋白结合很高、肝微粒体中代谢不明显的时候，悬浮原代肝细胞更为不可替代的体外模型。 3.2  经诱导验证原代肝细胞 酶诱导是指某些化合物能提高肝脏药物代谢酶的活性，导致合用的药物代谢速率加快，使得原药的血药浓度下降，使其疗效降低或丧失。若药物A能诱导某代谢酶的活性、而另一同服药物B为该代谢酶的底物，则A药有可能造成B药代谢清除率增加、暴露量降低，从而造成无法达到预期的药效。贴壁培养的原代肝细胞是酶诱导研究的经典模型，采用倍数变化方法，使用由已知的阳性和阴性对照药物校准的体外系统，将药物与细胞共孵育，测定孵育后CYP酶的mRNA表达水平倍数变化，以评估在研药物是否为酶的诱导剂。 3.3  经转运体验证原代肝细胞 转运体（Transporter）是指贯穿于各组织细胞膜上介导内源性或外源性物质进出生物膜的跨膜蛋白，主导药物的跨膜转运过程，影响着药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄。原代细胞来源于完整组织, 可表达存于该组织的全部转运体基因，与体内模型相关性较好，可用于研究药物代谢、转运及临床药物的相互作用。尤其是原代肝细胞可完整表达肝脏药物代谢酶和转运体，是评价经肝药物转运、代谢及毒性最常用的模型之一。 3.4  3D培养原代肝细胞 3D细胞培养是指将具有三维结构的材料与细胞在体外共同培养,使细胞能够在载体的三维立体空间结构中迁移、生长，构成三维的细胞载体复合物。3D培养类似于细胞在体内的生长方式，既能保留体内细胞微环境的物质及结构基础，又能展现细胞培养的直观性及条件可控性的优势。3D培养的原代肝细胞可提供与体内相似的支架系统，创建与体内类似的生长环境，具有与来源组织十分接近的结构特征和功能特性，在药物代谢、毒性评估等领域发挥重要作用。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

新品推荐 | 适配体分选：人CD8+T细胞分选的新方向 2023-02-10

细胞分选（Cell Sorting）是指根据细胞所具有的特性把某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术，它是对某一特定细胞进行生化分析和功能分析的前提和基础。常用的细胞分选方法主要有流式分选和磁性细胞分选，但随着 DNA、RNA 与蛋白质相互作用研究的不断发展和适配体技术的诞生，适配体分选也成为了细胞分选的一个新方向。 1    适配体 适配体是通过指数富集配体系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment , SELEX）从体外筛选得到的，能与相应配体专一性紧密结合的一类单链寡核苷酸序列，一般由几十个核苷酸组成，可以是RNA或单链DNA （ssDNA）。 适配体与各种配体的结合是基于单链核酸结构和空间构象的多样性，它可通过链内某些互补碱基间的配对以及静电作用、氢键作用等自身发生适应性折叠，形成一些稳定的三维空间结构，如发卡（hairpin）、假结（pseudoknot）、凸环（stemloop）、G-四分体（G-quartet）等。 适配体不但和抗体一样能与配体高效、专一地结合，而且具有许多连抗体都无法比拟的优点，如分子量小、配体广泛、稳定性高、无免疫原性、结构更为灵活、可与较小的靶标或抗体无法接近的隐蔽的位点结合等，正逐渐成为一种新的、普遍适用的技术，为化学、生物化学与分子生物学以及医学等领域提供一种高效、快速的研究平台。 2    新品上市 基于适配体在细胞分选方面的优势，IPHASE开发出了人CD8+T细胞适配体分选试剂盒，使用适配体取代了抗体，并将其与磁珠进行偶联，轻松实现人CD8+T细胞的分选，助力生命科学研究。 图1 适配体分选的原理 3    产品特点 l  便捷性 操作较为简单，对人员要求不高 l  高效性 仅需30min即可分选得到目的细胞 l  高纯度 目的细胞纯度可达95%以上 l  高活性 目的细胞活性可达95%以上 l  无需分离柱 仪器设备要求低，只需磁力架即可达到快速有效的细胞分选 4    相关产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的技术能力和技术经验的积累，自主研发并推出了人和小鼠两个种属的免疫磁性阳性分选和阴性分选试剂盒，主要集中在CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD14+、CD19+B和CD56+NK六个指标，助力于生命科学的研究。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

IPHASE/汇智和源 Ames菌株鉴定试剂盒升版啦！ 2023-01-17

细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test），又称Ames试验，是以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物检测基因突变的体外试验，可检测一个或数个碱基对的置换、增加或缺失造成的点突变，在食品、药品、化学品、化妆品、农药、医疗器械等多个领域中得到了广泛的应用。 1    Ames试验菌株及菌株鉴定 常用的Ames菌株有组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella Typhimurium）或色氨酸缺陷型大肠杆菌（Escherichia coli）。为保证检测结果的可靠性，Ames试验需使用菌株组合进行试验。推荐的菌株组合方案如下： 鼠伤寒沙门氏菌TA1535 鼠伤寒沙门氏菌TA97a或TA97或TA1537 鼠伤寒沙门氏菌TA98 鼠伤寒沙门氏菌TA100 鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2uvrA或大肠杆菌WP2uvrA（PKM101） 表1 常用Ames试验菌株突变基因和检测类型 然而，因突变型菌株的某些特性易丢失或变异，故需根据实际需求对菌株的基因型进行鉴定，保证菌株特性符合Ames试验的要求。尤其是在遇到以下情况时，更应该对菌株特性进行确认： （1）投入使用前； （2）在收到培养菌株后； （3）当自发回变数不在正常范围内时； （4）当对标准诱变剂丧失敏感性时； （5）当需重新进行菌株保藏时； （6）当使用主平板进行传代时。 表2 试验菌株生物学特性鉴定标准 2    IPHASE新版菌株鉴定试剂盒 IPHASE以各领域细菌回复突变试验的国家标准和指导原则为技术资料，特将Ames菌株鉴定试剂盒进行升版，对产品组成、规格、使用方法等多个方面进行了优化，避免资源浪费，使用更简单、便捷。 l  高效性 省去了培养基和试剂准备的时间，大大提高了工作效率。 l  便捷性 操作简单、便捷，方便大家使用。 l  实用性 依据Ames试验要求研发，满足试验需求，又不造成浪费。 3    相关产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

IPHASE/汇智和源新品推介 | Mini-Ames试剂盒 2023-01-09

1    Ames试验简介 Ames试验，亦称细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test)，于1975年由B.N.Ames教授实验室建立并不断发展完善而来，是评价化合物致突变性的一种经典方法，广泛应用于食品、药品、化学品、化妆品、农药、医疗器械、消毒产品、环境等多个领域。其基本原理是利用鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌营养缺陷型菌株与被检测化合物共培养，若化合物有一定的致突变性，则可使缺陷型菌株发生回复突变，重新突变为野生型。野生型菌株自身能合成组氨酸/色氨酸，能在无组氨酸/色氨酸的培养基上生长并形成肉眼可见的菌落，营养缺陷型菌株自身不能合成组氨酸/色氨酸，只能在无组氨酸/色氨酸的培养基上形成显微镜下可见的微菌落（即背景菌苔），据此可评价受试物的致突变性。 随着人们对Ames试验认知水平的提高和和分子生物学水平的不断发展，Ames试验也历经了一系列有助于改进检测效力和效率的改良。如通过引入含抗性因子质粒来提高试验体系的敏感度，除组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌外，也将色氨酸营养缺陷型大肠杆菌（E.coli）纳入其中，使用微孔板（如6孔板、24孔板、96孔板，甚至384孔板）或构建含荧光报告基因的质粒来实现高通量化等，并发展起来了波动Ames、微量波动Ames、Ames Ⅱ、Mini-Ames、Micro-Ames等多个改良的试验技术，广泛应用于不同领域的遗传毒理学监测和安全性评价工作中。 2    Mini-Ames试验优势 Mini-Ames试验是微型的Ames试验，是在标准Ames的基础上改良而来，将6孔板引入试验代替了平皿，但试验方法与标准Ames相同，在遗传毒理学监测和安评初筛工作中实用性较强。与标准的Ames试验相比，Mini-Ames试验又具有其自身的特点： l  供试品需求量少 用量仅为标准Ames的20% l  效率高 6孔板代谢平皿，大大减小了试验的工作量 l  高通量 可同时对多个供试品进行遗传毒性的筛选 l  试验结果可媲美标准Ames试验 结果一致性高 3    IPHASE Mini-Ames试剂盒及优势 3.1 IPHASE Mini-Ames试剂盒 IPHASE以标准Ames试验的标准和指导原则为指导，综合了公司多年的研发经验和在遗传毒理学研究方面的经验，开发出了Mini-Ames试验试验试剂盒，不但减少了供试品的需求量，而且还大大减少了试验的工作量，提高了工作效率，却保证了结果的准确性和可靠性，可广泛应用于不同领域遗传毒理学的研究中。 3.2 Mini-Ames试剂盒优势 l  便捷性 省去诱导S9制备、菌株培养和鉴定、试剂配制时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期 l  准确性 试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高 l  高效性 将6孔板引入试验，试验工作量大大减少 l  稳定性 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存 l  应用广 应用范围广，可用于食品、药品、化妆品、化学品、保健品、农药等的遗传毒性研究 4    相关产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

ADME系列—肺代谢与药物研发 2022-12-29

随着医学的不断发展，吸入治疗已被推荐为哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）等呼吸道疾病治疗的首选方法，研究与开发新型的吸入性药物是治疗呼吸道疾病和部分全身作用药物的重要方向。吸入型药物具有吸收快、起效快及避免首过代谢的特点，近年来备受关注。然而，吸入性制剂药物通过肺部给药，避免了肝脏首过效应，直接作用于肺部组织，对其进行药物代谢特征研究选用肝细胞及其亚细胞组织并不完全适用，因其在肺部停留时间较长，通常认为应当考察其在肺部的代谢情况。 1    肺中的药物代谢酶 肺中也含有许多药物代谢酶，包括P450酶、水解酶、结合酶、单胺氧化酶、黄素单加氧酶等，其中肺 P450 酶在对异物的生物转化及吸入的化学致癌物的失活和肺毒素的解毒方面发挥了重要的作用。在肺中表达的 P450 酶包括 CYP1A、CYP2A、CYP2B、CYP2E、CYP2F和 CYP4B等。P450 酶在肺泡晶状体、杯状细胞、纤毛上皮细胞和血管上皮细胞仅有较低含量，但在无纤毛细支气管上皮细胞（clara细胞）和Ⅱ型肺细胞中，P450酶的分布可能是很高的，但是这种细胞在肺中很少，所以肺中 P450 酶的功能相对较弱。但是，黄素单加氧酶的一个亚型 FMO2 在肺中高度表达，但在肝脏中却没有表达，但其生物学意义目前尚不十分清楚。此外，除了上述的 I 相代谢酶外，肺中也存在一些Ⅱ相代谢酶如 UGTs 和 STs。另外，人类肺微粒体中还有一种依赖花生四烯酸的过氧化物酶——前列腺素H合成酶(PHS)，它可以使有些致癌的芳胺类化合物通过过氧化作用而被活化，此酶只在肺中存在。 2    药物的肺代谢 脏是机体重要的呼吸器官，参与药物的体内循环、局部吸收及代谢。同时，肺脏是气体交换的重要场所，也是一个完善的给药系统和药物作用的靶器官，直接影响吸人型药物在肺部的局部处置以及经全身循环吸收至肺部的药物处置。由于肺中所含的药物代谢酶的含量和活性较低，因此药物在肺中的代谢是有限的，已知只有为数不多的药物如茶碱可以在肺中代谢。肺与肝脏不同，是一种复杂的极不均匀的组织，肺是由 40 种以上不同类型的细胞所组成，在许多类型的细胞中，其代谢酶的活性和含量存在显著的差异。此外，肺还有另一个特点，即血流丰富且灌流速率高、表面积大，有利于药物或化学异物随血流和呼吸气体而扩散，这些解剖和生理学上的特性对药物在肺脏中分布和代谢都有一定的影响。 3    IPHASE肺代谢产品及优势 IPHASE凭借先进的设备、专业的技术人员和多年研发的经验，开发出了不同种属动物的肾微粒体、肾S9、肾胞质液、肾匀浆等亚细胞模型产品，助力于药物的肺代谢研究。 l  酶活高  酶活可对标或高于同类进口产品 l  批量生产  采用批量生产方式，库充充足，可保证同一批次产品的供应 l  货期短  国内现货，保障客户使用需求 l  售后服务机制健全  有专业技术人员提供全方位服务 l  可定制  可提供特定物种、特定模型和特定年龄等非常规样品的定制服务 表1  IPHASE肺微粒体产品 表2  IPHASE肺S9产品 表3  IPHASE肺胞质液产品 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

IPHASE/汇智和源新品推介 — ABC转运体囊泡和SLC转运体细胞 2022-12-23

在临床应用中患者经常会同时使用多种药物，这些药物可能会产生药物-药物相互作用（Drug-drug interaction，DDI，简称药物相互作用），有可能导致严重不良反应或改变治疗效果。DDI 评估通常从体外试验开始，确定可能影响药物处置的因素以阐明潜在的 DDI 机制，并获得用于进一步研究的动力学参数，其主要内容包括：确定药物的主要消除途径；评估相关代谢酶和转运体对药物处置的贡献；考察药物对代谢酶和转运体的影响。长期以来，药物代谢酶一直是DDI研究的重点，近年来，随着分子生物学技术的发展，药物转运体研究取得重大进展，转运体在药物研究中的重要性也日益引起关注。 1    什么是药物转运体？ 转运体（Transporter）是指贯穿于各组织细胞膜上介导内源性或外源性物质进出生物膜的跨膜蛋白。药物转运体是以药物为基质，存在于组织或器官的细胞膜表面，担当药物跨膜转运功能的蛋白质总称，主要包括两个超家族：ABC结合盒转运体超家族（ATP binding cassette superfamily，ABC）和溶质转运体超家族（solute carrier family，SLC），主导药物的跨膜转运过程，影响着药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄。 ABC家族转运体由跨膜区和ATP结合区域组成，直接利用ATP分解产生的能量来进行物质的膜转运。药物转运与ATP酶活性直接相关，属于原发性主动转运类型。ABC转运蛋白分为七个亚型，即ABCA~G。 SLC家族转运体包括65个家族458个转运蛋白，利用细胞内外电化学电位差或离子梯度提供能量跨膜运输底物。与药物转运相关主要包括SLC21基因亚家族、SLC22A基因亚家族、SLC15A基因亚家族和SLC47A基因亚家族。 2    转运体研究的重要性 转运体在人体全身组织中均有表达，通过影响药物的吸收、分布和消除而影响药物的药代动力学和药效学特征。转运体与代谢酶协同作用可以影响药物的处置和药理作用。药物也可以影响转运体的表达或活性，从而导致内源性（如肌酐、葡萄糖）或外源性物质的处置发生改变。 在临床应用中，已发现有多种转运体与药物相互作用有关。介导药物外排的转运体主要包括P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、 或多药耐药蛋白1（Multi-drug resistance 1 protein，MDR1）、乳腺癌耐药蛋白（Breast cancer resistance protein，BCRP），属于AT P结合盒转运体家族成员，可利用水解ATP的能量对药物及内源性物质进行转运。介导药物进入细胞的转运体可将底物摄取至靶位以发挥药效，属于溶质转运体家族成员，主要包括有机阴离子转运多肽（Organic anion transporting polypeptide， OATPs）、有机阴离子转运体（Organic anion transporter，OATs）、多药及毒性化合物外排转运体（Multidrug and toxin extrusion proteins，MATEs）、有机阳离子转运体（Organic cation transporter，OCTs）等。 近年来，随着分子生物学技术的发展，药物转运体的研究取得了重大进展，多种药物已被证明是转运体的底物或抑制剂。如他汀类、青霉素、甲氨蝶呤等属于OATP1B1的底物，而环孢素、沙奎那韦、利福平及某些黄酮类化合物可抑制OATP1B1的转运功能；P-gp的底物多是疏水性阳离子，维拉帕米、环孢素A可竞争P-gp的结合位点，抑制或阻断P-gp的外排功能；BCRP的底物包括普伐他汀及多种植物雌激素，而雌二醇是BCRP的特异性抑制剂。综上所述，转运体可不同程度的影响药物的吸收、分布、排泄及药物相互作用，明确药物的转运机制有利于提高药物的安全性和有效性，指导临床合理用药，转运体的研究势在必行。 3    IPHASE转运体相关产品 IPHASE凭借先进的设备、专业的技术人员和多年研发的经验，推出了ABC转运体囊泡和SLC转运体细胞产品，助力于药物的转运研究。 表1 ABC转运体囊泡 表2 SLC转运体细胞 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询。 发文章得奖励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买

IPHASE/汇智和源 Ames试剂盒常见问题库 2022-12-01

Ames试验建立以来，在全球范围内应用了近五十年，是评价化合物致突变性的一种经典方法。随着人们对Ames试验认同度的不断提高，Ames试验已成为遗传毒理学不可或缺的一个检测项目，广泛应用于食品、药品、化学品、化妆品、农药、医疗器械、消毒产品、环境等多个领域。IPHASE/汇智和源综合多年Ames试剂盒研发和技术服务的经验，将试验过程和试剂盒使用中的常见问题进行了总结，供大家参考。 第一题    要开展Ames试验，如何选择溶媒/赋形剂？ 答：不同剂量浓度样品的制备是开展Ames试验的前提，制备符合试验要求的样品也有一些行业要求需要遵守。第一,溶媒/赋形剂的选择原则是其不与受试物发生反应，对菌株和S9没有毒性，没有诱变性；第二，首选蒸馏水，对于不溶于水的受试物可选择其它溶媒/赋形剂，若受试物对水不稳定，应选用不含水的有机溶剂或赋形剂；第三，若选用有机溶剂作为溶媒，首选DMSO，也可选其它溶媒，若选用的是不常用的溶媒或赋形剂，应有资料说明其理由，且若选用有机溶剂做为溶媒，每平板最高添加量不超过0.1mL。 第二题    Ames试验的最高剂量组应如何确定？ 答：Ames试验最高剂量组的确定取决于受试物对试验菌株的毒性和受试物的溶解度。建议先进行预实验测定受试样品的毒性和溶解度，应根据受试样品对细菌的毒性和在配制的最终混合物种的溶解度确定受试样品的最高剂量组。可将回变菌落数的减少、背景菌苔体积变小或处理后细菌存活率降低等作为细菌毒性的指征。 第三题    Ames试验组别如何设置？ 答：Ames试验通常需要包含未处理对照组（自发对照组）、阳性对照组（标准诱变剂对照组）溶媒对照组和样品剂量组四个组别的试验。需要注意的是，若溶解样品使用的溶媒和标准诱变剂使用的溶媒不一致时，还需加做DMSO的对照，且样品剂量组数量不同领域的要求会存在一定差异，需关注具体参照的标准或导则。 第四题    为什么要在有和没有代谢活化系统的情况下试验？ 答：代谢活化系统是诱导S9和辅因子的混合溶液。诱导S9本身是经药物诱导后的动物肝脏的组分，诱导的目的是让酶活得以放大。加代谢活化系统组评估的是代谢产物的遗传毒性，而不加代谢活化系统组评估的是原药的遗传毒性。对于未知化合物，因不确定是其自身，还是其代谢产物会有遗传毒性，故需在这两种情况下同时进行试验。 第五题    Ames试剂盒可以检测几个样品？ 答：Ames试剂盒可完成一个样品的Ames检测。Ames试剂盒（5菌版/正式试验）规格为250皿/盒，可在有和无代谢活化系统、5个菌株、三个平行的情况下进行对照组（未处理对照组、溶媒对照组、阳性对照组）和样品的5个剂量组的遗传毒性检测；Ames试剂盒（2菌版/预实验）规格为150皿/盒，可在有和无代谢活化系统、2个菌株、三个平行的情况下进行对照组（未处理对照组、溶媒对照组、阳性对照组）和样品的8个剂量组的遗传毒性检测；微量波动Ames试剂盒的规格我96孔*16板，可在有和无代谢活化系统、2个菌株、48孔/处理组的情况下进行对照组（未处理对照组、溶媒对照组、阳性对照组）和样品的5个剂量组的遗传毒性检测。 第六题    试剂盒中菌株可不可以传代培养？ 答：不建议对试剂盒中的菌株进行传代培养。原因主要有以下三点：第一，Ames试剂盒中菌株是以冻存菌液形式提供，可满足Ames试验要求，收到货后无需进行其它处理，可直接用于试验；第二，因Ames试剂盒中菌株均为营养缺陷型菌株，频繁处理可能使得其某些特性丢失；第三，Ames试验对菌株不但有浓度的要求，而且有自发和阳性突变菌落数的要求，国标或指导原则中虽然写的较为简单，但真正要达到其要求却很难。 第七题    Ames试剂盒是否可分多次去使用？ 答：Ames试剂盒试剂盒中菌株和S9复合物不建议反复冻融使用，如需分次多次试验，建议按照菌株分次进行。Ames试剂盒中菌株为营养缺陷型菌株，且以冻存菌液形式提供，反复冻融一方面可能会导致其某些特性丢失，另一方面也会直接导致自发回变数和阳性诱变剂回变数达不到标准或指导原则要求。S9复合物在Ames试验中是作为代谢活化系统，而发生代谢主要是酶的参与，反复冻融会导致酶活降低，可能会导致试验结果的假阴性。 第八题    当受试物（如某些抗生素）对细菌有高毒性时是否还需进行Ames试验？有没有其它验证方法？ 答：当受试物对细菌有高毒性时，仍应进行Ames试验，因为致突变性可能出现在较低的、毒性较小的浓度。为了减少具有潜在遗传毒性的化合物产生假阴性结果的风险，遗传毒性的研究通常需要多个试验的组合。任何一项遗传毒性试验中的阳性结果并不一定能说明化合物对人类真正具有遗传毒性或致癌性的危险。故可以加做其它试验，如基因突变试验、染色体畸变试验。 第九题    在实验的过程中，可能会因为化合物的溶解性不好，导致无法区分是菌落还是沉淀，该如何处理？ 答：常规的要求是平皿中可以有未溶解的化合物，但是沉淀的存在不能影响到菌落计数。若这种情况无法避免，可以培养48h后先进行一次菌落观察和计数，并继续培养至72h，若生长则可判定为菌落，也可挑取菌落接种至培养基培养观察是否生长。 第十题    试验过程中加S9组比不加S9组菌落数要高，是否正常？ 答：这种情况属正常现象，但即使偏高也会在国标或导则的要求范围内。可能是因为肝S9本身有痕量的氨基酸成分，可为会菌提供营养。 十一题    受试物浓度低未检出遗传毒性还是本身无遗传毒性？该如何判断？ 答：一方面，Ames试验的要求是，若试验结果为阴性，需进行验证，即需改变试验条件进行重复试验。另一方面，为了减少假阴性结果的风险，遗传毒性的研究通常需要多个试验的组合，可补做基因突变、染色体畸变、微核等其它试验。 十二题    医疗器械：浸提溶剂为什么选择水？按照标准应该选择生理盐水或DMSO。 答：关于医疗器械的浸提属于样品前处理的过程，试剂盒中未提供，需自行进行准备。试剂盒适用于多个领域的Ames检测，具体到每个领域，可能会有一定差异。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，200元礼品； 5分＜IF≤10分 300元； 10分＜IF≤15分 500元； IF≥15分 1000元； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 购    买    方    式 电话：400-127-6686 微信：直接扫描右侧微信二维码添加购买