CGT创新疗法——CAR-T细胞免疫简要介绍 2024-07-25

肿瘤已成为危害人类健康最严重的疾病之一，发病人数持续增加，死亡率高；中国肿瘤发病和死亡人口约占全球四分之一。目前肿瘤药物种类繁多，包括单克隆抗体、双特异性抗体及ADC药物等，但靶向疗法和免疫疗法等创新疗法已逐渐成为肿瘤治疗的重要方式！其中，CAR-T疗法作为免疫疗法的一种，与抗体药物一样，被认为是目前肿瘤治疗领域最具有发展潜力的治疗技术，具有巨大的临床转化价值。 一、CAR-T细胞疗法 CAR-T细胞疗法（ Chimeric AntigenReceptor T-Cell immunotherapy），全称嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是基于T细胞的一种免疫细胞技术。该技术通过向T细胞导入一种人工设计的CAR分子，从而赋予T细胞全新的靶向活化功能，形成CAR-T细胞，且不再具有MHC的局限性，仅通过抗原结合即可被活化，进而高效杀伤肿瘤细胞。 CAR-T细胞的关键是嵌合抗原受体（CAR）分子的设计。CAR是一种人工改造的受体分子，它可以赋予免疫细胞被某个特定靶细胞激活的特异性，从而增强细胞识别抗原信号与活化的功能。CAR分子主要由负责抗原识别的胞外区、跨膜区和胞内信号结构区组成。最终，CAR-T细胞通过体表嵌合抗原受体来靶向捕捉癌细胞体表的抗原,待结合成功后CAR-T细胞释放细胞因子通过穿孔素等对癌细胞进行靶向摧毁。 二、CAR-T细胞疗法的技术流程 通常一个完整的CAR-T细胞疗法持续5周左右，标准的CAR-T治疗流程主要分为以下7个步骤进行： （1) 评估病人是否符合CAR-T治疗的适应症； （2) 分离T细胞：通过外周血单个核细胞（PBMC）分离纯化出T细胞； （3) 改造T细胞：采用电穿孔、包病毒等基因编辑方式将提前设计好的CAR分子导入T细胞中，筛选并构建CAR-T细胞； （4) 扩增CAR-T细胞：在体外扩增CAR-T细胞，细胞数量与病人体重呈正相关； （5) 回输CAR-T细胞：将扩增完成的CAR-T细胞回输至病人体内，开始进行肿瘤细胞免疫治疗； （6) 监控反应：严密监控病人身体反应，控制前几天身体的剧烈反应； （7) 评估疗效：通常在回输后第15和30天评估CAR-T细胞对肿瘤的治疗效果。 图片来源：分子与细胞生物学 CAR-T细胞疗法至今已经历过五代技术更迭，但不能笼统地认为后代一定比前代强，仍需等待临床结果验证。除此以外，作为肿瘤细胞免疫治疗方法之一的CAR-T，也有其潜在的优、劣势。 肿瘤细胞 免疫疗法 优势 劣势 CAR-T 细胞疗法 杀瘤效果好：不受MHC和共刺激分子影响 实体瘤效果差：易被阻滞在实体瘤外 治疗效果持久：CAR-T细胞可在患者体内增值 脱靶效应：靶细胞非肿瘤细胞特异性，可能攻击正常细胞 高龄人群适用：不受年龄限制 可及性差：制备流程耗时久，效果因人而异 适宜联合用药：与抗体类等药物合并使用无额外毒副作用 稳定性差：CAR受体为外源性分子，具有一定的免疫原性 三、IPHASE相关产品 因此，CAR-T技术的发展离不开大量稳定的PBMC，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，凭借先进的设备、专业的技术人员和多年的研发经验，可提供经白细胞单采术分离的白细胞和PBMC，同时也含有试验动物猴的PBMC等，助力CAR-T细胞免疫技术的发展和肿瘤治疗研究！ 产品名称 规格 保存方式 白细胞 5 million 新鲜/冻存 人外周血单个核细胞 5/10/50 million 新鲜/冻存 人CD3+T细胞 5/20 million 新鲜/冻存 人CD4+T细胞 5/20 million 新鲜/冻存 人CD8+T细胞 5/20 million 新鲜/冻存 食蟹猴外周血单个核细胞 5 million 新鲜/冻存 恒河猴外周血单个核细胞 5 million 新鲜/冻存 免疫细胞复苏培养基 10/30 ml 2-8℃ 无血清单个核细胞冻存液 50/100 ml 2-8℃ 安全性 IPHASE提供产品的捐献者/动物体均为健康供体，经过预筛选，且病毒检测为阴性（HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒）。 合规性 IPHASE提供捐献者签署的知情同意书，来源清晰可溯源。 专业性 IPHASE提供的经白细胞单采术所得的产品，均由专业人员操作执行，每个批次的产品均提供相应COA，且全程冷链运输，安全、快速保证产品质量。 服务好 高质量的售后服务，确保试验一路绿灯。 可定制 可根据客户的特殊需求“专人专供”。 除此以外，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，在免疫细胞类产品分选具有多年经验，已开发相应多种属、多方法、多规格的免疫细胞分选试剂盒，同时也提供相应方法分离得到的原代免疫类细胞，供客户根据试验需求选择，推动细胞基因治疗技术广阔发展！ 产品名称 种属 分选方式 规格 PBMC 人/猴/犬/大鼠/小鼠/猪/兔/猫/豚鼠 全血分离 5/ 10/ 20 million 外周血CD14+ 人 阴选 2/ 5 million 外周血CD19+B 人 阴选 2/ 5 million 外周血CD56+NK 人 阴选 2/ 5 million 外周血CD34+ 人 阴选 100 million 外周血DC细胞 人 CD14+诱导 1.5 million 外周血巨噬细胞 人 CD14+诱导 1.5 million 红细胞（4%/ 2%） 人/猴/犬/大鼠/小鼠/猪/兔 来自5ml全血 100mL(4%) 100mL(2%) 脾脏CD8+T细胞 小鼠 阴选 0.5/ 1/ 5 million 脐带血CBMC 人 / 1 million 脐带血CD4+T 人 / 1 million 脐带血CD8+T 人 / 1 million 脐带血CD14+ 人 / 1 million 脐带血CD19+B 人 / 1 million 脐带血CD34+ 人 / 1 million 脐带血CD36+ 人 / 1 million 脐带血CD56+NK 人 / 1 million PBMC分离试剂盒 人/猴/犬/大鼠/小鼠/猪/兔/猫/羊驼 全血分离 分离100ml全血 CD3+T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阳选/适配体阳选/阴选/无痕分选 10/ 20/ 200 Test CD4+T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阳选/适配体阳选/阴选/无痕分选 10/ 20/ 200 Test CD8+T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阳选/适配体阳选/阴选/无痕分选 10/ 20/ 200 Test CD14+细胞分选试剂盒 人/猴/小鼠 阳选/适配体阳选/阴选/无痕分选 10/ 20/ 200 Test CD19+B细胞分选试剂盒 人/小鼠 阳选 10/ 20/ 200 Test CD56+细胞分选试剂盒 人/小鼠 阳选/阴选 10/ 20/ 200 Test 红细胞分离试剂盒 人/猴/大鼠/小鼠 全血分离 分离100ml全血 注：不同种属分选方式及分选规格以实际库存为主。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元礼品； 8分＜IF≤10分 1000元礼品； IF≥10分 2000元礼品； 注：①礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券；                     ②如遇我司公司名称书写不规范或不是第一作者等情况，对应给予奖品金额将发放50%； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 新型肝细胞体外代谢模型助力慢代谢药物动力学研究 2024-07-19

一、简介 药物代谢指药物在体内多种药物代谢酶的作用下，化学结构发生改变的过程，又称为生物转化过程。肝脏是人体最主要的药物代谢器官，由位于肝细胞滑面内质网的细胞色素P450（Cytochrome P450，CYP）酶系催化，因此构建体外模型如肝微粒体和悬浮原代肝细胞便于预测药物在体内的代谢转化过程。前者体外孵育时间一般小于1小时，后者一般小于4小时[1]。 然而近年来，实现药物的低清除率是药物设计的主要目标。低清除率药物即慢代谢药物是指在传统的肝微粒体和悬浮肝细胞代谢模型中无明显母药转化的药物，其体外内在清除率（CLint）低于1μL /( min· 106 cells)。即利用药物体外吸收、分布、代谢、排泄（即ADME）性质的高通量筛查及毒性筛选和早期代谢物鉴定等技术，在药物研发阶段设计提高药物的代谢稳定性，进而减少药物剂量使用、增加药物体内暴露量并延长其半衰期[1,2]。然而，传统的体外代谢模型在慢代谢药物的CLint测定上具有明显的局限性，并且代谢酶表型鉴定试验及代谢产物鉴定试验也会因药物无法产生足够的代谢产物而受到影响，均给药物代谢途径及机制研究带来新挑战。因此，新型肝细胞体外代谢模型的开发及应用对于创新药物研究的重要性不言而喻。 二、HepatoMax™和HepatoCon™系统——IPHASE新型肝细胞体外代谢模型 由于药物代谢酶活性随着体外孵育时间的延长而逐渐降低，因此，传统的体外代谢模型具有孵育时间短、代谢转化低和检测下限高（CLint检测定量下限为2. 5 μL /( min·106 cells)）等局限性，不能准确预测慢代谢药物的CLint[3]。同时，肝细胞相较于肝微粒体具有更多的氧化、还原、水解和二相结合反应所需要的酶，在体外系统中，许多新型的模型倾向于基于肝细胞系统进行优化，并进一步模拟体内环境，延长肝细胞的酶活保持时间，孵育时间的延长为监测到慢代谢药物足够的代谢转化提供了可能[2,3]。 鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，以人、猴、犬、大鼠及小鼠等多种属贴壁原代肝细胞和基质细胞为研究基础，开创了HepatoMax™系统和HepatoCon™培养基系统，并以贴壁原代人肝细胞为例，组建两种系统，测定10天时Tolbutamide药物代谢产物增加响应值及7天时特定酶型的活性及代谢稳定性，以对系统进行验证。 （1）两种系统药物验证培养流程如下： IPHASE-HepatoMax™以冻存贴壁原代人肝细胞和基质细胞组建共培养系统，将原代人肝细胞复苏后同基质细胞共同在HepatoP™培养基中孵育3天后开始进行给药测定，药物代谢在无血清 HepatoDo™培养基中进行，期间只补充药物而无需更换培养基，共测定给药后4、72、168和240小时的药物代谢产物增值结果以进行分析。 IPHASE-HepatoCon™则是在HepatoCon™培养基中培养冻存贴壁原代人肝细胞的系统，在将原代人肝细胞复苏后，单独在HepatoCon™培养基中培养3天后进行给药测定，后续给药时间、培养体系及测定方法同HepatoMax™系统。 同时，为了保证结果的准确性和严谨性，IPHASE同期进行了培养基对照（无细胞）和基质细胞对照，三次重复，结果表明IPHASE-HepatoMax™和IPHASE-HepatoCon™系统在第3天起产生强烈的代谢产物峰值响应，且第10天之前均显示出强劲的代谢周转率。 （2）药物代谢主要依赖肝细胞CYP450酶系，对其活性进行测定可更好地验 IPHASE-HepatoMax™和IPHASE-HepatoCon™系统具有良好地应用性。 IPHASE设定培养基对照（无细胞）、HepatoMax™、HepatoCon™和基质细胞四个类别，以贴壁原代人肝细胞为例，在肝细胞复苏3天后以非那西汀、安非他酮和咪达唑仑为底物，分别验证CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4在给药后第0天、3天和7天时的代谢产物增加值，结果表明IPHASE-HepatoMax™和IPHASE-HepatoCon™系统在第7天前均显示出活跃的酶活性，持续地促进药物的正常代谢。 （3）除了酶活性的验证，良好的代谢稳定性也是验证体外模型实用性不可或缺的重要步骤。 IPHASE设定HepatoMax™、HepatoCon™和基质细胞三个类别，以贴壁原代人肝细胞为例，在复苏原代肝细胞3天后给药，测定Tolbutimide在80小时内的代谢稳定性，结果表明IPHASE-HepatoMax™和IPHASE-HepatoCon™系统在测定时间最长值内均显示出强大的代谢清除活性。 综上所述，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，其最新开发的以贴壁原代人、猴、犬、大鼠及小鼠等多种属肝细胞及基质细胞为基础的IPHASE HepatoMax™和IPHASE HepatoCon™体外模型具有优秀的代谢周转率、活跃的酶活性及强大的代谢清除活性，为广大客户开发低清除率药物提供新选择，更是实现药物开发不可或缺的重要伙伴！ IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 参考文献 [1] Di L , Obach R S .Addressing the Challenges of Low Clearance in Drug Research[J].Aaps Journal, 2015, 17(2):352.DOI:10.1208/s12248-014-9691-7. [2] 阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160. [3] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. A novel relay method for determining low-clearance values[J]. Drug metabolism and disposition, 2012, 40(9): 1860-1865. 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元礼品； 8分＜IF≤10分 1000元礼品； IF≥10分 2000元礼品； 注：①礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券；                     ②如遇我司公司名称书写不规范或不是第一作者等情况，对应给予奖品金额将发放50%； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 ASO药物体外代谢研究解决方案 2024-07-10

小核酸药物是目前发展最为迅猛的基因疗法之一，将带来“除小分子药和抗体药”之外的第三次制药浪潮。小核酸药物包括反义寡核苷酸（ASO）、小干扰RNA（siRNA）、微小RNA（miRNA）、信使RNA（mRNA）、适配体（aptamer）等。其中，ASO药物是小核酸药物领域发现最早、获批最多的药物类别，也是该领域研发的重要方向之一。 一、ASO药物作用机制 反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASO）指与靶基因mRNA互补的一段单链DNA或RNA序列，长度通常为15-25nt，通过碱基配对原则与其互补的RNA结合，可以调节靶RNA的功能。ASO的作用机制主要分为两大类：一类是基于RNase H1-介导的mRNA降解机制(图1A所示）；另一大类是基于ASO结合带来的空间位阻，封闭mRNA关键区域，从而影响mRNA的成熟或者翻译为蛋白质（图1B所示）。 图1 ASO作用机制（图片来源：Nature Reviews Drug Discovery, 2020, 19(10): 673-694） 二、ASO药物体外代谢研究策略 和传统小分子药物一样，在药物临床前研究阶段，通常需要对ASO药物进行体外代谢研究，并提供代谢途径及其产物相关信息。ASO药物的代谢酶主要为核酸外切酶和核酸内切酶，广泛分布于血液和各个组织器官，一个合适的体外代谢研究体系，能够最大程度地预测体内的情况，对于ASO药物的早期筛选非常重要。表1所示为常用的ASO药物体外代谢研究体系。 表1 ASO药物的体外代谢研究体系 生物基质 试验类型 备注 血清/血浆 代谢稳定性，血浆蛋白结合试验 金属螯合剂抗凝的血浆不适合代谢稳定性研究；ASO药物血浆蛋白结合试验可选择超滤法和超速离心法。 肝S9 代谢稳定性，代谢产物鉴定 肝S9一定程度上可以代替肝组织匀浆使用。 肝微粒体 代谢稳定性 肝微粒体的核酸酶活性较低，但也有文献报道人肝微粒体也能代谢ASO化合物。 肝组织匀浆 代谢稳定性，代谢产物鉴定 酶体系比较全面，推荐用于ASO药物的体外筛选评价。 肝细胞 代谢产物鉴定，细胞摄取试验 肝细胞酶体系最为完善，适用于肝靶向的ASO药物研究。 溶酶体 代谢稳定性 溶酶体具有丰富的酶体系，包括核酸酶和各种水解酶等，是研究ASO药物代谢稳定性的高效实验体系。 脑组织匀浆、脑脊液 代谢稳定性，脑组织匀浆和脑脊液蛋白结合试验 对于神经系统及神经肌肉适应症类的ASO药物，可选择脑组织匀浆和脑脊液进行体外相关研究。 需要指出的是，在药物研发前期只用1-2个体外代谢体系去正确预测体内稳定性或代谢情况是非常困难的。因此建议在早期ASO药物筛选时进行多体系代谢研究相互验证，不断优化试验方案，进而选择与体内相关性最佳的体外代谢体系进行筛选研究。 三、IPHASE相关产品 为满足客户对于ASO药物体外代谢研究的需求，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，凭借先进的设备，专业的技术人员和多年研发的经验，开发出来多种用于ASO药物体外代谢研究的产品，助力广大客户进行ASO药物早期筛选研究。 类别 分类     亚细胞组分 肝溶酶体 酸化肝匀浆液 肝/肠/肾/肺S9 肝/肠/肾/肺微粒体 肝/肠/肾/肺胞质液 原代肝细胞 悬浮肝细胞 贴壁肝细胞 专属血浆 血浆稳定性 血浆蛋白结合 空白生物基质 空白脑组织 空白脑脊液 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 推出CYP家族重组酶及SLC家族转运体新产品 2024-07-03

在临床应用中患者经常会同时使用多种药物，这些药物可能会产生药物-药物相互作用（Drug-drug interaction，DDI），最终导致严重不良反应或减弱治疗效果，因此，有必要对 DDI 发生的可能及其影响程度和严重性进行科学评估。药物相互作用按照发生机制可分为理化性质、代谢酶、转运体、靶点及疾病介导的相互作用，按照影响指标可分为药代动力学相互作用和药效动力学相互作用，而开展体外试验就是为了全面了解在研药物的药代动力学（Pharmacokinetics，PK）特征，以初步估计药代动力学相互作用的可能机制以及可能的严重程度，并支持 DDI 临床研究时机的确定。鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，致力于开发CYP重组酶和ABC、SLC转运体产品，助力广大客户进行人源化体外药代动力学及可能潜在的 DDI 研究。 一、重组酶CYP2A6/ CYP2D6 药物代谢发生在肝脏、小肠、肾等组织中，肝脏是代谢的主要器官，其微粒体酶活性最强，其中最重要的氧化酶因其在还原状态下可与 CO 结合，在波长 450 nm 处有一最大吸收峰，故认为是细胞色素 P450 酶。位于肝脏内质网和线粒体内膜上的 CYP450 是参与药物Ⅰ相代谢的关键酶，经酶催化的氧化反应是药物体内代谢的主要途径，参与80%~90%药物的Ⅰ相代谢。因此，可通过检测 CYP450 酶活性，了解药物的体内代谢过程，预测药物疗效和不良反应。同时，《药物相互作用指导原则2020》也指出“申请人应在首次人体试验之前开展体外代谢研究，鉴定主要代谢产物，为临床前安全性数据外推到人体提供必要的信息，并为临床研究设计提供参考。 鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，继研发CYP2C8、CYP2C9后，再次以HEK298细胞为载体，成功构建“CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5和CYP2D6+reductase”三种重组酶。IPHASE技术人员在4℃进行重组酶制备，并通过不同底物的代谢产物生成率来验证重组酶的活性。即IPHASE技术人员调整重组酶终浓度为25pmol/ ml，并分别以终浓度为0.8uM的香豆素和终浓度为0.4uM的右美沙芬为CYP2A6+reductase+b5和CYP2D6+reductase+b5、CYP2D6+reductase的底物，在37℃下将底物和重组酶共同孵育5min，结果显示底物均有代谢，并可得到其产物生成率，表明“CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5和CYP2D6+reductase”这三种重组酶研发成功！ Recombinase Marker Substrate Reaction Rate CYP2A6+reductase+b5 Coumarin 64.5 pmol/min/mg protein CYP2D6+reductase Dextromethorphane 122.3 pmol/min/mg protein CYP2D6+reductase+b5 Dextromethorphane 273.9 pmol/min/mg protein 同时，为表明重组酶活性，IPHASE技术人员以相同条件，使用自研产品和竞品同时进行上述试验，结果显示IPHASE CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5及CYP2D6+reductase三种重组酶验证活性均同竞品相似或高于竞品，表明IPHASE重组酶活性较好，满足客户需求！ 二、转运体OATP1B1/OATP1B3 转运体在人体全身组织中均有表达，通过影响药物的吸收、分布和消除而影响药物的药代动力学和药效学特征。根据功能可将转运体分为摄入型转运体（SLC）和外排型转运体（ABC）。OATP1B1和OATP1B3属于SLC家族，是肝细胞窦状隙膜上表达的主要摄取转运体，在多种药物的肝脏摄取中发挥重要作用。OATP1B1、OATP1B3的底物众多，很多在结构上不相关的药物也会经由其转运，因此，在体外研究其与化合物的关系至关重要！目前已明确属于OATP1B1及OATP1B3的底物、抑制剂及诱导剂如下所示： 基因符号-SLCO1B1 底物：阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、辛伐他汀酸、依那普利、非索非那定、甲氨蝶呤、缬沙坦、波生坦、奥美沙坦、阿曲生坦、利福平、SN-38、伊立替康、头孢托仑、瑞格列奈、西罗莫司、杀奎那韦、洛匹那韦、头孢哌酮、头孢唑林及托拉塞米; 抑制剂:环孢素、吉非贝齐、利福平、罗红霉素、泰利霉素、利托那韦、杀奎那韦、奈非那韦、西地那非、阿托伐他汀酸、辛伐他听、辛伐他汀酸、阿托伐他汀酯、洛伐他汀、洛伐他汀酸、格列本脲、贯叶金丝桃素、紫杉醇、瑞格列奈、替米沙坦、他克莫司、曲格列酮; 诱导剂:双氯芬酸、布洛芬、罗美昔布; 基因符号-SLCO1B3 底物：波生坦、地高辛、依那普利、红霉素、非索非那定、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、利福平、奥美沙坦、替米沙坦、阿曲生坦、缬沙坦、伊马替尼、甲氨蝶呤、紫杉醇、多烯紫杉醇、CCK-8、头孢拉定、头孢唑林、头孢美唑、头孢托仑、头孢氨苄、萘夫西林; 抑制剂:环孢素、利福平、红霉素、罗红霉素、克拉霉素、泰利霉素; 诱导剂:双氯芬酸、布洛芬、罗美昔布; 资料来源：有机阴离子转运多肽OATP1B1、OATP1B3 的基因多态性及其介导的药物相互作用研究进展 鉴于此，IPHASE继成功研发转运体MATE2-K、OAT1、OAT3和OCT2后，再次以HEK293为细胞载体，成功构建瞬时转染重组OATP1B1、OATP1B3转运体。IPHASE技术人员以终浓度为1 μM的普伐他汀钠（Deoxycholic acid， sodium salt）为底物，通过LC-MS/MS检测空载细胞HEK293和转运体细胞OATP1B1、OATP1B3细胞对普伐他汀钠的代谢能力，结果显示转运体细胞OATP1B1底物代谢量为HEK293细胞底物代谢量的13倍，OATP1B3则为34倍！均远高于《药物相互作用指导原则2020》规定的2倍，表明OATP1B1和OATP1B3转运体细胞模型构建成功！ 三、IPHASE相关产品 除了最新研发的重组酶CYP2A6和转运体OATP1B1、OATP1B3细胞，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，相继开发出了多种重组酶及转运体细胞相关产品，助力广大客户体外研究。 分类 产品名称 规格 CYP重组酶 CYP2A6+reductase+b5 0.5mL, 0.5nmol CYP2D6+reductase 0.5mL, 0.5nmol CYP2D6+reductase+b5 0.5mL, 0.5nmol CYP2C8+reductase+b5 0.5mL, 0.5nmol CYP2C9+reductase+b5 0.5mL, 0.5nmol UGT重组酶 UGT1A1 0.5mL,5mg/mL UGT1A3 0.5mL,5mg/mL UGT1A4 0.5mL,5mg/mL UGT1A6 0.5mL,5mg/mL UGT1A9 0.5mL,5mg/mL UGT1A10 0.5mL,5mg/mL UGT2B17 0.5mL,5mg/mL 转运体细胞 OATP1B1细胞 8-10 million cells OATP1B3细胞 8-10 million cells OAT1细胞 8-10 million cells OAT3细胞 8-10 million cells OCT2细胞 8-10 million cells MATE2-K细胞 8-10 million cells IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 PROTAC体外DMPK研究一站式产品解决方案 2024-06-20

小分子药物因为其可口服的高便利性，易吸收、易穿透细胞膜的高可成药性，成为现代药物开发的基石。但传统的小分子药物采用的是“占位驱动”模式来抑制蛋白功能，导致包括受体、激酶及通道类型等靶点在内的基因仅有约400种可作目标药物，而已知的可成药的基因约3000种。因此，“事件驱动”模式蛋白降解靶向嵌合体（Proteolysis-Targeting Chimera, PROTAC）技术为新药研发提供了新思路，并成为新药研发的一大利器。 一、蛋白降解靶向嵌合体简介 PROTAC是一种异双功能分子，结构由两个配体通过Linker连接而成，其中一个配体可结合目标蛋白（Protein of interest, POI），另一个配体可以靶向E3连接酶。其本质是存在于所有真核生物中的天然蛋白降解机制——泛素-蛋白酶体途径（Ubiquitin-Proteasome Pathway, UPP）。该途径涉及一个三酶级联反应，即泛素分子在泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）及泛素连接酶（E3）等系列酶作用下，将细胞内蛋白质分类并选中靶蛋白，并对靶蛋白进行特异性修饰，最终形成靶蛋白多聚泛素链并被蛋白酶体识别和降解。其中，E1激活酶和E2结合酶参与的过程称为泛素的激活，单独的泛素本身并没有任何生物功能，只是一种分子标记蛋白，发挥作用的前提是必须有ATP来提供能量。 图片来源：Autophagy and the ubiquitin-proteasome system: collaborators in neuroprotection. 因此，PROTAC是一种“事件驱动”的模式，即它可以和靶蛋白任何位置结合，且不需要高亲和力，就可以诱导靶蛋白降解。PROTACA分子在进入细胞后，其目标蛋白配体可特异性结合靶蛋白，另一端可募集E3连接酶，最终形成POI-Linker-E3 Ligase三元复合物，拉近E3连接酶和靶蛋白的距离，从而诱导E3连接酶为靶蛋白贴上泛素标签，继而促进靶蛋白的降解。随着靶蛋白降解而掉落下来的PROTAC分子可继续被循环利用。 图片来源：Discovery of a first-in-class CDK2 selective degrader for AML differentiation therapy 二、蛋白降解靶向嵌合体体外研究难点 尽管PROTAC因其独特作用机制具有突破性的优势，但PROTAC分子的开发仍面临大量挑战。 口服给药是大多数疾病治疗的理想给药方式，但PROTAC由于其独特的分子结构并不满足“分子量小于500；氢键供体数目小于5；氢键受体数目小于10；脂水分配系数小于5和可旋转键的数量不超过10个”的经典小分子药物类药五原则。PROTAC分子量通常在600~1200 Da之间，一般可达到700 Da以上，且一般伴有溶解性较差、体内外渗透性表现不佳，口服生物利用度通常偏低及吸收较差等情况。 此外，相较于暴露量越多越好的传统小分子药物来说，PROTAC由于结构的复杂性，具有新的挑战。通常，在合适的或相对较低的浓度下，PROTAC可诱导靶蛋白和E3连接酶形成“靶蛋白PROTAC-E3连接酶”三元复合物；然而，当浓度过高时，就易竞争性地出现“靶蛋白-PROTAC”或“E3连接酶-PROTAC”等二元复合物，即“钩子效应”，导致药效降低甚至出现毒性积累。因此，适时地调整PROTAC剂量对于靶向治疗至关重要。 目前现有研究表明PROTAC分子在各种属中均呈现较高的血浆蛋白结合状态，常规的血浆蛋白结合试验可能无法准确的体现其血浆蛋白结合率，而血浆蛋白结合率的测定是必须的。血浆蛋白结合试验可测定化合物在血浆中的稳定性，以防止化合物在高血浆蛋白结合率的情况下出现药物代谢过缓并导致化合物不被清除的现象。同时，PROTAC分子本身结构特殊，分子量大，为提高其渗透性与溶解度，在药物设计时往往需要引入杂原子，且Linker部分在代谢层面其代谢产物的产生可能发生药物毒性作用或药效不足的现象，因此，对PROTAC分子代谢产物的鉴定至关重要。 而根据《药物相互作用研究技术指导原则》，了解转运体介导的药物相互作用也是评价体外药代动力学的重要内容之一。早期常采用Caco2细胞、高表达BCRP细胞或高表达BCRP膜囊泡进行体外评估，然而由于PROTAC分子结构的特殊性，其渗透性一般较差，采用完整的细胞结构可能低估PROTAC分子对外排转运体的抑制作用。 综上所述，对PROTAC分子进行体外DMPK研究至关重要，然而，目前尚无定项针对PROTAC药物研究的指导原则，因此，在实际研究中，研究者往往会参照小分子药物研究的指导原则。 三、PROTAC体外研究策略 尽管PROTAC是一种暂无指导原则的新兴小分子药物，但它“事件驱动模式”的功效性促使药物研发领头军们对其展开了孜孜不倦的研究。目前国内部分药企对PROTAC分子药物的开发已接近国际水平并达到了临床阶段。 图片来源：clinicaltrials, chinadrugtrials,太平洋证券整理 目前常规检测化合物的溶解度通常是利用PH 7.4的磷酸缓冲液，但已有研究报道PROTAC分子在不同状态下（禁食/非禁食）的肠液中其溶解度显著不同，即在肠液中PROTAC分子溶解度相对更高，且非禁食状态下的溶解度效果优于禁食状态的肠液。针对渗透性研究，PROTAC分子的研究遵循了常见的体外模型结构，即可利用Caco2、MDCK和LLC-PK1等模型。 而为防止“钩子效应”、确定血浆蛋白结合率和代谢产物等情况，对PROTAC分子进行体外代谢研究是至关重要的！PROTAC分子体外DMPK研究一般也遵循小分子药物的研究方式，即了解PROTAC药物的代谢关键酶、选择合适的体外模型及测定其血浆稳定性等。 确定代谢关键酶 对PROTAC进行体外药代动力学研究，除了基本的I相（CYP酶）代谢和II相（UGT酶）代谢，已有报道发现醛氧化酶（Aldehyde oxidase, AOX）可参与PROTAC分子的代谢，但存在明显的种属差异，需要多种属验证确保数据真实性。 全血/血浆稳定性试验 作为体外药代动力学早期研究的试验之一，全血中含有丰富的水解酶类，可催化药物的水解代谢，且根据经验发现，全血中不稳定的化合物一般含有酰胺键、磺酰胺键、肽键及酯键等官能团，由此可进一步推断导致PROTAC在全血中不稳定性的位置的可能性。 血浆蛋白结合率测定 已知PROTAC分子在各种属中均呈现较高的血浆蛋白结合状态，所以对其进行种属间比较或体外-体内外推（in vitro-in vivo extrapolation, IVIVE）时需充分考虑化合物在孵育体系中的游离率和全血中游离率数据。 常见的体外代谢研究模型如下： 鉴于PROTAC分子溶解性对外排转运体研究的影响性，采用高表达BCRP膜囊泡模型更具说服力，即膜囊泡可使ABC转运体的底物结合位点暴露于细胞外缓冲液中，更适用于研究候选药物作为底物和抑制剂与ABC转运体的相互作用。 四、IPHASE体外DMPK研究“一站式”产品解决方案 IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，紧随药物开发前沿，针对PROTAC分子药物体外DMPK研究方向，研发了多种类、多层次、多领域的体外生物试剂，助力PROTAC药物临床前阶段研究！ 产品类别 组分分类 名称 亚细胞组分试剂 肝微粒体 人/猴/犬/兔/大鼠/小鼠/地鼠/猫/小型猪 微粒体 肝S9 人/猴/犬/大鼠/小鼠/小型猪 S9 肝胞质液 人/猴/犬/大鼠/小鼠/小型猪 胞质液 原代肝细胞产品 / 人/猴/犬/大鼠/小鼠/小型猪 悬浮/贴壁原代肝细胞 转运体产品 ABC 家族转运体 人类BCRP/BSEP/MDR1/MRP1/MRP2/MRP3/MRP4/MRP8 ABC转运体 SLC 家族转运体 人类 OATP1B1/OAT1/OAT3/OCT2/ OATP1B3/OATP2B1/OCT1/NTCP/MATE1/MATE2K/OATP1A2 SLC转运体细胞 重组酶产品 CYP 人CYP 1A2+/2A6+/2B6+/2C8+/2C9+/2C19+/2D6+/2E1+/3A4+/1A1+/3A5+ 还原重组酶 UGT 人UGT 1A1/1A3/1A4/1A6/1A7/1A8/1A9/1A10/2B7/2B15/2B17 重组酶 血浆相关产品 血浆蛋白结合试剂 人/猴/犬/大鼠/小鼠血浆蛋白结合试剂 平衡透析装置 血浆蛋白结合试验平衡透析装置 平衡透析膜 血浆稳定性试验产品 人/猴/犬/大鼠/小鼠 空白血浆（稳定性专用）/全血 缓冲液 / PH 7.4 磷酸缓冲液 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 参考文献: [1] 药明康德，《药物代谢与动力学：前沿、策略与应用实例》。 [2] Churcher, I., 2018. Protac-Induced Protein Degradation in Drug Discovery: Breaking the Rules or Just Making New Ones? Journal of Medicinal Chemistry 61, 444–452. [3] Békés M, Langley DR, Crews CM. PROTAC targeted protein degraders: the past is prologue[J]. Nat Rev Drug Discov. 2022 Mar;21(3):181-200. [4] Goracci L , Desantis J , Valeri A , et al. Understanding the Metabolism of Proteolysis Targeting Chimeras (PROTACs): The Next Step toward Pharmaceutical Applications[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2020, 63(20):11615–11638. [5] 《药物相互作用研究技术指导原则》。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

全面匹配标准要求！IPHASE新版Ames试剂盒都有这些变化！ 2024-06-05

Ames试验建立以来，在全球范围内应用了近五十年，是评价化合物致突变性的一种经典方法。随着人们对Ames试验认同度的不断提高，Ames试验已成为遗传毒理学不可或缺的一个检测项目，使用此方法测试的化合物已达上万种，并且测试结果在很多生物试验中证实了其效用性。当前，Ames试验在食品、药品、化学品、化妆品、农药、医疗器械、消毒产品、环境等多个领域中得到了广泛的应用，成为产品研发和申报阶段必须开展的遗传毒性试验。 目前，Ames试验主要参照OECD标准、各领域的国家标准、行业标准或指导原则进行，试验所用试剂和成分复杂且制备繁琐，且要保证试验结果符合相关方法要求一般需要经验的积累和数据的收集，诱导S9的制备、相关试剂的配制和符合要求的菌液的制备成为了本试验的限速步骤，要完成一次结果准确且理想的实验往往需要几周甚至几个月的时间，试验结果的不可控性常常令工作者望而却步。 IPHASE遗传毒性Ames试剂盒的推出给研究者带来了新的希望，它不仅仅为Ames试验的开展提供了便捷的工具，更是将难理解的标准简单化，将复杂的试验流程标准化，真正做到了急客户所急，想客户所想！自2012年上市至今，IPHASE未曾停下探索的脚步，积极接收并收集研究者使用Ames试剂盒后的反馈意见，并不断验证和优化，现已成功推出新版Ames试剂盒，欢迎大家垂询！ 下面，我们来一起聊一聊IPHASE新版Ames试剂盒到底做了哪些升级？ 通用的遗传毒性Ames试剂盒如何匹配不同领域的Ames试验要求？ 技术人员对目前现行有效的不同领域国家标准、行业标准、指导原则等进行了系统的研读，该试验整体要求保持一致，但也会存在一些细节上的差异，如底层培养基配制，食品GB 15193.4和医疗器械YY/T 0870.1是一致的，但化妆品安全技术规范、农药登记GB/T 15670.14却和其它都不相同。基于以上问题，IPHASE在试剂盒使用方法上做了明确区分，从而实现了通用Ames试剂盒可适用于不同标准。 试剂盒组分GS、VS、HBT等，傻傻分不清楚？ IPHASE旧版遗传毒性Ames试剂盒中产品组分大多使用本公司内部代号，了解到客户对该组分名称存在困惑，我们在新版试剂盒中特对其进行修改，组分名称可完全与各领域指导原则或标准匹配，打消客户疑虑。具体修改信息如下： 序号 旧版名称 新版名称 1 底层培养基VS 磷酸盐贮备液（V-B） 2 底层培养基GS 40%葡萄糖溶液 3 HBT溶液 组氨酸-色氨酸-生物素溶液 菌株难匹配、试剂配制繁琐？ 因Ames试验暂无试剂盒法的标准，故如需严格按照标准要求开展试验，菌株需新鲜制备。但是，Ames试验除菌株外，还需配备诱导大鼠肝S9，磷酸盐贮备液（V-B）、40%葡萄糖及其它系列试剂，IPHASE为解决客户诱导大鼠肝S9及其它配套试剂配制繁琐和困难的问题，特推出不含菌株的遗传毒性Ames试剂盒，方便客户使用。 标准诱变剂受管制，保存使用受限制？ 标准诱变剂是证明Ames试验有效和试验体系正常工作的标尺，但有些标准诱变剂已列入危险化学品名录，如叠氮化钠应按照剧毒化学品的标准管理程序进行采购、入库、贮存、领用、运输和记录，使用过程更是需要小心又小心。IPHASE经过不断筛选，成功实现了标准诱变剂的替代，在满足试验要求的基础上，也提高了试验的安全性。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 siRNA药物体外代谢研究解决方案 2024-05-28

核酸药物凭借其独特的技术特点成为近年来新药研发领域关注的焦点。核酸药物包括小干扰RNA（siRNA）、反义寡核苷酸（ASO）、微小RNA（miRNA）、小激活RNA（saRNA）、信使RNA（mRNA）、适配体（aptamer）和抗体核酸偶联药物等，是基因治疗的一种形式。其中siRNA药物作为核酸药物研发的热点，凭借基因沉默效率高、不良反应可控、合成方便等优点，在新药研发领域得到了广泛应用，有望成为继小分子和抗体药物后最有希望开发出新药的药物。 一、SiRNA药物作用机制 小干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA）又称为沉默RNA、短干扰RNA或非编码RNA，是一类长度在21~25bp的短双链RNA分子。合成的siRNA通过胞吞作用进入细胞中，随后少量的siRNA能够从溶酶体中逃逸进入细胞质，进入细胞质后，siRNA 被合并到 RNA诱导的基因沉默复合物中（RNA-induced silencing complex，RISC），随后siRNA分离成两条单链：正义链（sense strand）和反义链（antisense strand），之后正义链被剪切在细胞质中降解，而结合反义链的RISC被活化并且特异性地结合靶mRNA并切断靶mRNA，引发靶mRNA的降解，从而阻断靶蛋白的翻译。 图1 SiRNA作用机制 （图片来源：Eur J Pharmacol.2021;905:174178） 二、SiRNA药物代谢研究策略 SiRNA药物在体内主要被血浆和组织中广泛存在的核酸内切酶和核酸外切酶所代谢，而不是通过肝脏的Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶代谢。目前上市的siRNA药物经过结构改造后，在血液循环中较少被代谢。通常绝大部分siRNA药物被肝脏迅速摄取，小部分分布在其他组织，在肝脏或其他组织中经由核酸酶代谢。对于siRNA药物体内代谢研究，通常是对动物体内的血浆、尿液、粪便及靶向组织（肝或肾等）进行代谢产物鉴定和定量生物分析。  然而在药物早期筛选阶段，化合物数量很多，动物体内试验周期较长，成本很高，很难通过体内试验大批量进行化合物筛选或结构优化。因此，合适的体外代谢研究对于siRNA药物的早期筛选尤为重要。体外代谢研究具有通量大，实验周期短等优势，更有助于我们提高对于siRNA药物的筛选速率。表1所示为常用的siRNA药物的体外代谢研究体系。 表1 siRNA药物的体外代谢研究体系 基质 适用范围 血清/血浆 评估siRNA药物在血液循环系统中的代谢稳定性情况，一般是体外siRNA药物的必检项。 肝S9 含有肝组织中大部分酶且容易获取，一定程度上可以代替肝组织匀浆使用。 肝组织匀浆 酶体系比较全面，推荐用于siRNA药物的体外筛选评价。 肝细胞 酶体系最为完善，适用于肝靶向的siRNA药物代谢评价。 溶酶体 溶酶体是siRNA药物通过胞吞进入细胞后的主要接触的环境，具有丰富的酶体系，包括核酸酶和各种水解酶等，是siRNA代谢的重要场所，是研究siRNA药物代谢稳定性的高效实验体系。 三、IPHASE相关产品 为满足客户对于siRNA药物体外代谢研究的需求，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，凭借先进的设备，专业的技术人员和多年研发的经验，开发出来多种用于siRNA药物体外代谢研究的产品，助力广大客户进行siRNA药物早期筛选研究。 合规性 生产产品的组织均由正规渠道获得，来源清晰。 安全性 生产人员及动物均经过传染源检测，保证产品质量安全。 纯度高 细胞纯度可达到90%以上。 活率高 细胞活率可达85%以上，满足客户需求。 复苏率高 冻存复苏率可达90%以上。 可定制 可根据客户特殊需求，提供特殊种属、特殊组织细胞的定制服务。 以下为IPHASE部分产品列表 类别 分类 亚细胞组分 肝溶酶体 酸化肝匀浆液 肝/肠/肾/肺S9 肝/肠/肾/肺微粒体 肝/肠/肾/肺胞质液 原代肝细胞 悬浮肝细胞 贴壁肝细胞 专属血浆 血浆稳定性 血浆蛋白结合 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 多领域遗传毒理Ames试验试剂盒全新升级 2024-05-23

细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test)，亦称Ames试验，于1975年由美国加利福尼亚大学伯克利分校生化系B.N.Ames教授实验室建立并不断发展完善，至今已成为国际上通用的遗传毒理评价体系的必检项目，同时也是许多遗传毒理学新兴技术发展过程中对照验证结果的试验之一，广泛应用于化合物的致突变性和潜在致癌性的初筛检验。 一、Ames试验简介 Ames试验是以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物来检测基因突变的体外试验，可预测受试物的遗传毒性和潜在致癌性。常用的菌株有组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌和色氨酸营养缺陷型的大肠杆菌。 其原理是利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌来检测点突变，涉及DNA的一个或几个碱基对的置换、插入或缺失。鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌试验菌株在无组氨酸或色氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸或色氨酸的培养基上才能正常生长。致突变物存在时可将营养缺陷型菌株回复突变为原养型，即在无组氨酸或色氨酸的培养基上也能正常生长。因此可根据菌株形成数量来判断受试物是否具有致突变作用。同时，受试物检测应在有和没有代谢活化系统的条件下进行试验，因为某些致突变物仅在有代谢活化后才能发生细菌回复突变情况。 二、IPHASE相关产品 Ames试验的开展主要参照OECD标准、国家标准或指导原则等，试验流程复杂，试验所需试剂多样且制备繁琐，要保证试验结果稳定、可靠、可重现性良好往往需要丰富的经验和不断的数据积累，要完成一次理想的试验往往需要耗费大量的人力、物力及资源，故常常令科研工作者望而却步。 因此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，凭借多年的经验和专业的技术人才，遵循食品、农药、化学品、化妆品、医疗器械及药品等多个方向的国家遗传毒性研究技术指导原则，开发了一系列不同领域下的Ames试验组分试剂盒，确保其内组分、浓度及名称等信息均完全匹配国家标准，为广大客户省去了溶液配制时间，大大缩短了试验周期。 便捷性 省去试剂配制的时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。 准确性 试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。 稳定性 试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 应用广 应用范围广，可用于食品、药品、化妆品、化学品、医疗器械、农药等的遗传毒性研究。 此外，针对拓展项目等初次接触细菌回复突变试验或暂无菌株等数据、经验积累的客户，IPHASE同时推出针对食品、农药、化学品、化妆品、医疗器械及药品等不同领域下的新升级版标准Ames试验试剂盒，其内组分、浓度及名称完全匹配特定领域下的细菌回复突变试验国家标准。IPHASE将营养缺陷型菌株固态化（冻存菌液）、将代谢活化系统简便化、将所有配套试剂成品化，真正实现了“一站式”试验的目的。同时根据不同的试验目的，IPHASE也推出了不同规格的产品，可满足客户的不同需求。 本次开发、升级产品将于6月准时上线，在此，IPHASE期待与不同领域下客户的深入交流，望广大客户敬请期待！ IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

IPHASE/汇智和源 微核试验检测方法—流式细胞术 2024-05-17

微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核生物细胞在有丝分裂后期由于染色体片断丧失着丝粒从而游离于细胞质中的一种异常结构，是染色体畸变的一种表现形式。微核是细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍留在细胞质中的整条染色单体或染色体的无着丝粒断片或环。这些片段或染色体在分裂末期不能进入主核，在子细胞进入下一次分裂间期时，便浓缩成主核之外的小核，即微核。目前有辐射、化学诱变剂等较多理化因素可引起染色体断裂，且均可导致细胞分裂从而产生微核现象。 一、 微核试验的简介 微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA损伤的技术，其目的是以微核作为遗传毒性检测终点，用于检测染色体断裂剂及非整倍体诱导剂，是目前公认的筛选致突变物的主要方法之一，在化合物遗传毒性评价系统中占据着重要的地位。 阴性对照 阳性对照 微核试验可分为体外微核及体内微核试验，体外微核试验常以CHL、V79及CHO-K1细胞作为试验系统，而体内微核试验使用较多的是啮齿类动物的嗜多染红细胞（PCE）或者网织红细胞（RET)。PCE或RET是有丝分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞过程中的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，而微核仍保留在细胞质中并十分易于辨认。因此，嗜多染红细胞或网织红细胞是体内微核试验的首选细胞群。 图片来源：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成（Cole et al，1979，1981） 二、 流式体内微核检测 除了人工阅片等常规检测方法外，流式细胞术等自动化检测方法也被用于微核检测。流式细胞术(Flow cytometry)检测方法是20世纪70年代发展起来的定量测定细胞和亚细胞成分的方法。该方法通过流式细胞仪以激光束为光源，将待测样品进行荧光染色，然后在液体载体里将单个细胞通过激光束产生的荧光信号转变为电信号，最终通过仪表显示来达到定量测定的目的。 利用流式细胞术进行体内微核鉴定则是由于与成熟的红细胞相比，未成熟的网织红细胞仍然含有RNA和某些表面蛋白质（比如转铁蛋白受体，也称为CD71），因此可用RNase降解RNA以排除RNA的干扰，且不同抗体可用于区分不同细胞或成分，如CD71抗体可区分网织红细胞和成熟红细胞，CD61抗体可用于排除血小板的干扰，而后可用PI染液对DNA进行染色，从而轻易鉴别出微核。流式体内微核检测流程如下： 三、IPHASE相关产品 流式细胞术微核检测具有检测速度快、结果客观可靠及可满足高通量检测要求等特点，因此，IPHASE作为体外研究生物试剂引领者，凭借先进的设备，专业的技术人员和多年研发的经验，现正在开发小鼠体内微核试验流式检测试剂盒。小鼠染毒处理后，于不同时间点收集外周血，便可用该试剂盒进行流式微核检测。试剂盒提供了用于小鼠外周血流式微核检测的主要试剂，包括抗凝剂、RNase溶液、CD71、CD61荧光抗体、生物标准品及PI染液等，且试剂盒各组成成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性好。 与体内微核检测试验一样，体外微核检测在预测致癌危险性、检测非整倍体诱发剂及其它遗传危害方面也具有重要的地位。IPHASE现已开发出了包括采用人工阅片方法的体外微核试验试剂盒在内的一系列专门用于体外遗传毒性研究的产品，助力广大客户进行体外遗传毒理学研究。 名称 规格 体外微核试验试剂盒 5mL*32 test 遗传毒性Ames试剂盒 100/150/200/250 dishes 遗传毒性Mini-Ames试剂盒 6孔板*24板/6孔板*40板 微量波动Ames试剂盒 16*96 wells/ 4*384 wells UMU遗传毒性试剂盒 96 wells TK基因突变试剂盒 20ml*36 test HGPRT基因突变试剂盒 20ml*36 test 体外染色体畸变试剂盒 5mL*30 test 彗星试验试剂盒 20/50 test 便捷性 省去诱导S9制备、试剂配制的时间，大大缩短了实验周期。 准确性 试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。 稳定性 试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 应用广 应用范围广，可用于食品、药品、化妆品、化学品、医疗器械、农药等的遗传毒性研究。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

喜讯：河北工业大学使用IPHASE肝微粒体发表高质量文章（IF=6.1） 2024-05-11

近日，河北工业大学生物物理研究所马标老师，使用IPHASE品牌产品：人肝微粒体在《Journal of Agricultural and Food Chemistry》权威期刊上发表文章《Liensinine, a Novel and Food-Derived Compound, Exerts Potent Antihepatoma Efficacy via Inhibiting the Kv10.1 Channel》，影响因子6.1！ 本论文中，对课题组提出的药物结合袋进行了虚拟筛选，并确定了一种高效的Kv10.1通道抑制剂Liensinine，可以高效抑制通道电流，IC50为0.24±0.07 μM。分子动力学模拟和定点突变实验揭示了其抑制Kv10.1通道的分子机制。同时抗肿瘤实验分析了Liensinine在体内外均能抑制肝癌细胞的增殖。另外，使用IPHASE肝微粒体产品以体外代谢反应体系探究了其I相代谢情况。综上所述，提出一种食品来源化合物，Liensinine，可以作为靶向Kv10.1的抗肝癌治疗药物的先导化合物。 摘要 Plant metabolites from natural product extracts offer unique advantages against carcinogenesis in the development of drugs. The target-based virtual screening from food-derived compounds represents a promising approach for tumor therapy. In this study, we performed virtual screening to target the presumed inhibitor-binding pocket and identified a highly potent Kv10.1 inhibitor, liensinine (Lien), which can inhibit the channel in a dose-dependent way with an IC50 of 0.24 ± 0.07 μM. Combining molecular dynamics simulations with mutagenesis experiments, our data show that Lien interacts with Kv10.1 by binding with Y539, T543, D551, E553, and H601 in the C-linker domain of Kv10.1. In addition, the interaction of sequence alignment and 3D structural modeling revealed differences between the C-linker domain of the Kv10.1 channel and the Kv11.1 channel. Furthermore, antitumor experiments revealed that Lien suppresses the proliferation and migration of HCC both in vitro and in vivo. In summary, the foodderived compound, Lien, may serve as a lead compound for antihepatoma therapeutic drugs targeting Kv10.1. 完整版文献可在【IPHASE】公众号后台留言【获取文章】 再次恭喜文献发表，以及对我司产品的认可，希望以上文献能帮助大家了解目前研究进展及我们的核心技术，欢迎各位新老客户联系我们咨询、提出意见，愿我们的努力成果与您的科研碰撞出不一样的火花！ 发    文    章    得    奖    励 凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品： 非SCI论文及IF≤5分，500元礼品； 5分＜IF≤8分 800元； 8分＜IF≤10分 1000元； IF≥10分 2000元； 注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券； 活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。